目前納微的色譜填料和色譜柱種類越來(lái)越多，合作伙伴也越來(lái)越多，所以對(duì)納微的產(chǎn)品和技術(shù)的咨詢也日益增多，今天我們將一些大家經(jīng)常咨詢的問(wèn)題和解答提供如下便于大家的理解和更好地在以后的工作中使用。

Q1: 硅膠填料的機(jī)械強(qiáng)度如何以及不同粒徑的硅膠填料的操作壓力各是多少？

A1: 高機(jī)械強(qiáng)度是硅膠的特點(diǎn)之一。對(duì)于粒徑10μm 的硅膠填料我們推薦設(shè)定80-100Bar 的壓力，對(duì)于20-40μm 的硅膠填料我們推薦設(shè)定40-70Bar 的壓力，來(lái)裝填動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱。 硅膠填料的機(jī)械強(qiáng)度會(huì)影響裝柱及使用壽命。納微的硅膠填料擁有卓越的機(jī)械強(qiáng)度，通過(guò)在DAC柱上反復(fù)裝填20次，觀察納微UniSil®10-100 C8與進(jìn)口同類型的色譜填料的柱壓力變化（圖1），可以看出UniSil®柱壓基本穩(wěn)定，而進(jìn)口填料的柱壓不斷升高，顯然UniSil®的機(jī)械強(qiáng)度優(yōu)于進(jìn)口填料。另外通過(guò)電鏡對(duì)其形貌觀察發(fā)現(xiàn)（圖2），進(jìn)口填料經(jīng)裝柱后出現(xiàn)部分破碎的情況（圖2右），UniSil®填料基本無(wú)變化（圖2左）。

 

Q2:填料中孔徑的概念？

A2：我們通常所說(shuō)的孔徑實(shí)際上是個(gè)統(tǒng)計(jì)的、平均的概念，即平均孔徑，它是指累積孔徑分布曲線50%處的平均孔徑，或是與孔徑分布曲線的最高頻度相對(duì)應(yīng)的平均孔徑。通過(guò)測(cè)試納微UnSil5-1000與進(jìn)口同類型的色譜填料的孔徑分布，得出孔徑分布曲線（圖3），可以看出UnSil的孔徑分布較窄，而進(jìn)口填料的孔徑分布較寬，因而UnSil的硅膠填料孔徑的控制更加精準(zhǔn)。

以下是納微科技不同孔徑的微球在掃描電鏡下的圖片（圖4）。納微可以定制最大4000Å孔徑的微球。

 

Q3:為什么要做封端處理？

A3:一般常見(jiàn)的硅膠填料（沒(méi)有經(jīng)過(guò)封端處理），pH耐受性都在2-8之間，在堿性環(huán)境下，硅膠的Si-O-Si-O結(jié)構(gòu)會(huì)被破壞而溶解。即使在pH5-7的環(huán)境中，硅膠表面的Si-OH也會(huì)電離。使得堿性化合物產(chǎn)生拖尾，嚴(yán)重影響分離效果。封端處理以后可以減少待測(cè)組分與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)，改善和保持較好的峰形，這對(duì)于堿性化合物的分離尤其重要。而不同的封端技術(shù)也會(huì)直接影響色譜柱的效能。納微科技的硅膠填料經(jīng)過(guò)特殊封端處理技術(shù)后(如UniSil Ultra系列產(chǎn)品），使得填料的pH耐受性有所提高（pH 2-10）,并且覆蓋硅膠金屬雜質(zhì)還可以減少堿性化合物的拖尾，增強(qiáng)峰型對(duì)稱性。

通過(guò)在同等條件下，對(duì)UniSil Ultra與同類型的進(jìn)口硅膠填料進(jìn)行堿（pH10.0）沖洗，可以看出UniSil Ultra比同類型的進(jìn)口D硅膠填料可以耐受更多次數(shù)和更長(zhǎng)時(shí)間的強(qiáng)堿清洗（圖5），從而證明UnSil Ultra的的耐堿性更強(qiáng)，使用壽命更長(zhǎng)。

堿洗條件：MeOH/TEA (pH=10.0)=40:60

沖洗體積：60CV

柱效測(cè)試：流動(dòng)相：ACN/H2O=60:40

柱溫：35℃

樣品：甲苯

Q4:C18柱選用的基本原則？

A4:(1)選用經(jīng)封端處理的色譜柱，可以防止堿性化合物的拖尾現(xiàn)象。

(2)選用含碳量高的柱子，可以增加保留值。（還要綜合考慮孔道結(jié)構(gòu)和空間）

(3)選用小顆粒的填料，可以提高分離度。（還要綜合考慮壓力和設(shè)備投入）

(4)分子量大的組分選用大孔徑填料的柱子。

(5)納微可以根據(jù)不同的樣品條件提供不同規(guī)格的C18填料，例如常規(guī)的UniSil®C18, 耐堿性較強(qiáng)的UniSil® C18 Ultra,以及適用于100%水溶液的UniSil® C18 Polar等。

 

Q5:測(cè)定多肽，一般采用什么柱子？流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？

A5: 多肽一般還是可以用C18的，根據(jù)分子量不同可以選擇150Å、300Å的孔徑，有些小肽用100Å也可以。在C18上保留太強(qiáng)時(shí)，C8，苯基，C4，C3也都可以用于多肽的分離。三肽也可以嘗試100Å C18，不過(guò)小肽往往極性偏大，普通C18上可能沒(méi)有保留，這時(shí)需要使用親水型C18或Hilic模式。

以下是為大家推薦的納譜ChromCore的色譜分析柱產(chǎn)品：

（1）分子量較大的多肽（2000D以上）可以優(yōu)先考慮納譜ChromCore C18，ChromCore 300 C18。

（2）小肽可以用ChromCore 120 C18，如果無(wú)保留，選擇親水型C18或Hilic模式。

(3) C8系列有ChromCore 120 C8、ChromCore C8、ChromCore 300 C8、ChromCore AQ C8（親水型)。

(4) 苯基系列有ChromCore Phenyl、ChromCore PFP、ChromCore Biphenyl。

(5) C4系列有ChromCore C4、ChromCore 300 C4、ChromCore 300 C4-T。

(6) 親水型C18可選ChromCore AR C18、ChromCore AQ C18、ChromCore Polar C18。

(7) Hilic模式可選ChromCore HILIC-Amide、ChromCore HILIC-Imidazole、ChromCore Diol、ChromCore CN等。

 

Q6:我之前有了解到貴公司也有手性色譜柱，之前買過(guò)國(guó)外品牌的手性柱，其手性柱價(jià)格相比普通反相色譜柱，要高出很多倍，不知道是本身柱子裝填技術(shù)的難度大還是其他什么原因？它的主要技術(shù)關(guān)鍵在什么方面？

A6：這個(gè)問(wèn)題我們請(qǐng)納微科技專門負(fù)責(zé)手性產(chǎn)品的朱總解答

（1）手性柱使用的填料介質(zhì)是大孔多孔介質(zhì)，生產(chǎn)工藝復(fù)雜；（2）在介質(zhì)上涂敷或鍵合的手性位點(diǎn)官能團(tuán)生產(chǎn)工藝復(fù)雜；（3）官能團(tuán)與介質(zhì)基球涂敷或鍵合工藝難度大，且工藝復(fù)雜；（4）裝柱工藝及成本也較高。這些都導(dǎo)致了手性色譜柱比普通反相柱價(jià)格高出很多。納微科技手性填料包括OD、OJ、OZ、AS、AJ 5個(gè)型號(hào)的產(chǎn)品，手性色譜柱從填料的生產(chǎn)（包括直鏈淀粉產(chǎn)品研發(fā)）到裝柱一系列過(guò)程都是自己完成，所以和國(guó)外相比，性價(jià)比更高，另納微還可以提供手性拆分純化服務(wù)。

 

Q7:色譜柱的技術(shù)都有哪些？國(guó)內(nèi)外的色譜柱都有何差別？

A7:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料是色譜柱的心臟，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，需要經(jīng)驗(yàn)積累。納微有專門提供裝柱培訓(xùn)的課程。有興趣的朋友可以聯(lián)系我們。

很多人都認(rèn)為國(guó)內(nèi)和國(guó)外的色譜柱差距很大：原因在于國(guó)內(nèi)的的公司都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料，一般都會(huì)買國(guó)外現(xiàn)成的填料裝柱，填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外，對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料——裸硅膠，國(guó)產(chǎn)的還不過(guò)關(guān)，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比，差距很大。

正解來(lái)了：

事實(shí)上這種觀點(diǎn)已經(jīng)過(guò)時(shí)了，納微科技經(jīng)過(guò)長(zhǎng)達(dá)十余年的潛心研發(fā)，目前已擁有單分散硅膠色譜填料的精準(zhǔn)制備技術(shù)、表面功能化技術(shù)和規(guī)�；�生產(chǎn)能力，打破了填料長(zhǎng)期依賴進(jìn)口的局面。目前受中美貿(mào)易戰(zhàn)的影響，國(guó)外的色譜柱和色譜填料不僅價(jià)格昂貴，而且供貨不穩(wěn)定，出問(wèn)題反饋后響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，這些都會(huì)給企業(yè)造成不小的影響。

在納微科技，您將不會(huì)有以上的困擾。因?yàn)榧{微具備以下優(yōu)勢(shì)：

（1）大規(guī)�；�生產(chǎn)能力（硅膠填料200kg/批次）

（2）從基球的大規(guī)模生產(chǎn)-表面鍵合和封端-裝柱全程在公司內(nèi)部完成。可以保障整個(gè)生產(chǎn)工藝過(guò)程可控和可溯源。

（3）快速響應(yīng)：納微市場(chǎng)部有免費(fèi)400電話和QQ在線咨詢，您可以隨時(shí)隨地在線咨詢?nèi)魏斡嘘P(guān)問(wèn)題。線下在國(guó)內(nèi)各個(gè)地區(qū)都有銷售經(jīng)理專門和您對(duì)接，有任何需求或者問(wèn)題都可以第一時(shí)間做出響應(yīng)。

詳細(xì)可以參考納微科技的董事長(zhǎng)江必旺博士接受佰傲谷專訪的文章：生物制藥耗材和設(shè)備的國(guó)產(chǎn)化是必然趨勢(shì)