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                                當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > ACE HILIC色譜柱方法開發(fā)指南Ⅴ - HILIC法平衡要點

                                ACE HILIC色譜柱方法開發(fā)指南Ⅴ - HILIC法平衡要點

                                瀏覽次數(shù):6725 發(fā)布日期:2019-4-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
                                HILIC法平衡時間

                                在RPLC模式下,可再現(xiàn)保留所需的典型柱平衡約為10倍柱體積。

                                圖14中可清楚反映這一點
                                但是,對于HILIC分離則不同。通常,HILIC色譜柱的平衡時間比RPLC色譜柱的更長。

                                這是該技術(shù)的一個特點,也是可再現(xiàn)保留所必需的。
                                在固定相粒子周圍建立和形成穩(wěn)定的水合層對可再現(xiàn)HILIC色譜法很重要(HILIC色譜法的重現(xiàn)性至關(guān)重要)。

                                所花費的時間也因相位(固定相)特性、洗脫劑和分析物而各有不同,因此取決于具體應(yīng)用。

                                下面的指導(dǎo)原則可用作近似法(近似的參考)。

                                重要的是:在HILIC方法開發(fā)中,平衡將作為各項分離的一個參數(shù)進(jìn)行研究(對于每一個成熟的分離方法,在HILIC方法開發(fā)時,平衡時間都將作為一個參數(shù)進(jìn)行研究)。
                                對于全新的未使用色譜柱,建議使用60-80倍柱體積,以在最初建立HILIC所需的水層。

                                 

                                圖14
                                RPLC和HILIC模式中達(dá)到全新未使用色譜柱所需的柱體積數(shù)的對比

                                一旦建立水層,可實現(xiàn)可再現(xiàn)(重現(xiàn)性)和一致的保留和色譜法(可實現(xiàn)色譜方法的重現(xiàn)性,一致的保留時間)。
                                運行完成后,應(yīng)清洗色譜柱并根據(jù)第9節(jié)中相關(guān)指導(dǎo)說明儲藏。

                                對于色譜柱第二次以及之后的每次運行,建議只采用20倍柱體積,以達(dá)到穩(wěn)定的保留次數(shù)(時間),見圖15。

                                 

                                圖15
                                HILIC模式中第二次及隨后每次分析達(dá)到平衡所需的柱體積數(shù)對比
                                色譜柱:ACE 5 HILIC-A,
                                100 x 3.0 mm
                                流動相:10 mM甲酸銨,pH4.7(溶于MeCN/H2O中)(90:10 v/v)
                                流速:0.43 mL/min
                                溫度:25 °C
                                檢測:UV, 214 nm
                                樣本:
                                1) 2’-脫氧鳥苷
                                2) 4-羥基苯甲酸
                                3) 沙丁胺醇

                                 

                                梯度HILIC平衡

                                同時,ACE HILIC相也可以使用可再現(xiàn)梯度HILIC法(ACEHILIC色譜柱也可重現(xiàn)HILIC方法的梯度洗脫)。

                                經(jīng)確定,兩次進(jìn)樣之間大約需要10倍柱體積。兩次進(jìn)樣之間的平衡時間低于新色譜柱所需的時間,因為只需要重新建立起始條件。

                                新色譜柱需要平衡,以在固定相顆粒上形成水合層(而新色譜柱需要長時間平衡,是因為需要在固定相顆粒上形成水合層)。

                                 

                                圖16
                                顯示了兩次進(jìn)樣之間使用20倍柱體積平衡情況下,兩次連續(xù)進(jìn)樣梯度HILIC分析的極佳保留再現(xiàn)性。

                                來源:廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司
                                聯(lián)系電話:020-22826668
                                E-mail:vink@gzflm.com

                                標(biāo)簽: ACE HILIC色譜柱
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