試劑盒酶的底物

酶的底物 
1.3.3.1 HRP的底物 HRP催化過(guò)氧化物的氧化反應(yīng)，最具代表性的過(guò)氧化物為H2O2，其反應(yīng)式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O上式中，DH2為供氧體，H2O2為受氫體。

2.在ELISA試劑盒中，DH2一般為無(wú)色化合物，經(jīng)酶作用后成為有色的產(chǎn)品，以便作比色測(cè)定。常用的供氫體有鄰苯二胺(O-phenylenediamine, OPD)、四甲基聯(lián)苯(3,3",5,5tetramethylbenzidine, TM和ABTS[2,2"-azino-di-(3- ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

3.OPD氧化后的產(chǎn)品呈橙紅色，用酸中止酶反應(yīng)后，在492nm處有最高吸收峰，靈敏度高，比色便當(dāng)，是HRP結(jié)合物最常用的底物。OPD自身難溶于水，OPD?2HCL為水溶性。曾有報(bào)道OPD有致異變性，操作時(shí)應(yīng)予留心。OPD見(jiàn)光易蛻變，與過(guò)氧化氫混組成底物運(yùn)用液后更不安穩(wěn)，須現(xiàn)裝備現(xiàn)用。在試劑盒中，OPD和H2O2一般分紅二組分，OPD可制成一定量的粉劑或片劑方法，片劑中含有發(fā)泡助溶劑，運(yùn)用更為便當(dāng)。

4.過(guò)氧化氫則配入底物緩沖液中，ELISA試劑盒有制成易保存的濃縮液，運(yùn)用時(shí)用蒸餾水稀釋。先進(jìn)的ELISA試劑盒中則直接配成含保護(hù)劑的作業(yè)濃度為0.02% H2O2的運(yùn)用液,只需參與OPD后即可作為底物運(yùn)用液。TMB經(jīng)HRP作用***產(chǎn)品顯藍(lán)色，目視對(duì)比明顯。

5.TMB性質(zhì)較安穩(wěn)，可配成溶液試劑，只需與H2O2溶液混和即成運(yùn)用液，可直接作底物運(yùn)用。其他，TMB又有無(wú)致癌性等利益，因此在ELISA中運(yùn)用日趨廣泛。酶反應(yīng)用HCL或H2SO4中止后，TMB產(chǎn)品由藍(lán)色呈黃色，可在比色計(jì)中定量，最適吸收波長(zhǎng)為405nm。

6.ABTS雖不如OPD和TMB靈敏，但空白值極低，也為一些試劑盒所選用。另一種HRP的底物為3-(4-羥基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，經(jīng)HRP作用后，產(chǎn)品顯熒光，可用熒光光度計(jì)測(cè)量。用于ELISA的利益為可加寬定量測(cè)定的線性規(guī)劃。

7.HRP對(duì)氫受體的專(zhuān)一性很高，ELISA試劑盒僅作用于H2O2、小分醇的過(guò)氧化物和尿素過(guò)氧化物(urea peroxide)。H2O2運(yùn)用最多，但尿素過(guò)氧化物為固體，作為試劑較H2O2便當(dāng)、安穩(wěn)。試劑盒供應(yīng)尿素過(guò)氧化物片劑，用蒸餾水溶解后，在底物緩沖液中密閉、低溫（2～8℃）可安穩(wěn)1年。