組織硫化氫含量比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

YIJI組織硫化氫含量比色法定量檢測試劑是一種旨在通過堿性苦味酸與肌酐反應，產生藍色產物所呈現(xiàn)的吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中硫化氫含量的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良亞甲基藍方法、成功實驗證明的。其適用于各種人體、動物組織裂解樣品等硫化氫水平檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術背景

硫化氫（hydrogen sulfide；H2S）是一種自然發(fā)生的，具有腐蝕性和可燃性，不穩(wěn)定的易被氧化的無色氣體，為半胱氨酸脫硫（desulfuration）代謝產物，是第三個生理性氣體信使分子（messenger molecule）或氣體傳導分子（gasotransmitter），存在于腦、心臟、肺、肝、小腸、胰腺以及海綿體（cavernosum）組織等，其中腦組織含量較低，腎組織含量較高。神經系統(tǒng)的胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）和心血管系統(tǒng)的胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase；CGL）是參與內源性硫化氫生成的主要成員。一旦機體缺氧，硫化氫含量即增高。硫化氫旨在調節(jié)組織內含硫氨基酸的水平，具有心血管系統(tǒng)的生理功能和病理生理調節(jié)作用，例如誘導血管平滑肌松弛，血管擴張（vasodilation），致血壓下降，以及促炎性作用。同時硫化氫具有毒性作用，會造成嗅覺神經迅速癱瘓，抑制細胞色素C氧化酶，增加線粒體膜通道孔開放，引起心臟、小腸、生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)平滑肌過度松弛，而產生器官損傷、低血壓、心動過緩（bradycardia）等癥狀。在自然環(huán)境中，硫化氫是硫循環(huán)（sulfur cycle）的主要中間產物，包括有機硫化物的礦物化或分解、微生物的同化作用，以及氧化還原。作為化學窒息性（asphyxiant）氣體，硫化氫對于魚類和其它水生動物具有毒性作用，同時也是細菌污染的標志。使用醋酸鋅（zinc acetate）在堿性條件下，捕獲硫化氫，形成穩(wěn)定的硫化鋅沉淀；在酸性條件下，溶解的硫化鋅與催化劑對氨基二甲基苯胺（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine）和氯化鐵（ferric chloride）反應，產生藍色的亞甲基藍（methylene blue），通過其終點吸收峰值的變化（670nm波長），來定量分析硫化氫的含量。                   

產品內容

YIJI清理液（Reagent A） 100毫升

YIJI穩(wěn)定液（Reagent B）   5毫升

YIJI去干擾液（Reagent C）   5毫升

YIJI反應液（Reagent D）   2.5毫升

YIJI顯色液（Reagent E）     2毫升

YIJI標準液（Reagent F）    1毫升

產品說明書      1份

保存方式

保存YIJI反應液（Reagent D）和YIJI標準液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在在4℃冰箱里；YIJI反應液（Reagent D）避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細胞

微型臺式離心機：用于樣品操作

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

實驗步驟

• 樣品準備
• 手術取出動物組織，并秤重以確定200毫克組織重量  
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入3毫升YIJI清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的1毫升YIJI清理液（Reagent A）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40至80下） 
• 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
• 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為10000g
• 移取500微升到新的1.5毫升離心管
• 加入250微升YIJI穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
• 放在冰槽里待測（注意：須1周內使用）

• 標準樣品準備

• 移取500微升YIJI標準液（Reagent F）到新的1.5毫升離心管
• 加入250微升YIJI穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
• 放在冰槽里待測

• 測定準備

• 準備好待測樣品，置于冰槽里
• 設定好分光光度儀：波長670nm，并置零

四、樣品測定

• 移取250微升YIJI去干擾液（Reagent C）到上述待測樣品或標準樣品管里，混勻
• 加入125微升YIJI反應液（Reagent D）
• 加入100微升YIJI顯色液（Reagent E），混勻
• 室溫下孵育20分鐘
• 放進微型臺式離心機離心3分鐘，速度為5000g
• 移取1毫升上清液到比色皿
• 即刻放進分光光度儀檢測，獲得待測樣品和標準樣品讀數(shù)

五、計算樣品濃度

[（待測樣品讀數(shù) X樣品稀釋倍數(shù)） ÷標準樣品讀數(shù)] X 200 微摩爾/升＝微摩爾硫化氫/升

轉化為組織實際硫化氫含量

納摩爾硫化氫/毫升 X  1毫升（組織懸液） =納摩爾/200毫克組織

注意事項

• 本產品為20次操作，包括標準樣品
• 本產品檢測范圍在0.1毫克/升（10微摩爾/升）至34毫克/升（1000微摩爾/升）
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 系統(tǒng)操作過程中，標準樣品測定只需1次
• 試劑出現(xiàn)沉淀可以離心去除后檢測
• 測定值由低到高變化
• 用戶可以使用664nm至670nm波長范圍的任一波長進行檢測
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品量
• 樣品中碘（iodine）大于2毫克/升、硫代硫酸鹽（thiosulfate）或亞硫酸鹽（sulfite）大于10毫克/升、氰亞鐵酸鹽等可能干擾檢測
• 硫化氫濃度換算：1毫克/升=29.4微摩爾/升
• 本公司提供系列生化學檢測試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
• 本產品經鑒定檢測敏感

使用承諾

上海一基秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發(fā)現(xiàn)確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。