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                                                              English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
                                                              當(dāng)前位置 > 首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 細(xì)胞篩選方法和步驟【賽百慷】

                                                              細(xì)胞篩選方法和步驟【賽百慷】

                                                              瀏覽次數(shù):3953 發(fā)布日期:2017-8-28  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

                                                              篩選步驟:

                                                              a.殺滅曲線的確定
                                                                     1.將未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按每孔0.05million鋪入24孔板,孵育過(guò)夜,
                                                                     2.第二天,除去24孔板中舊的培養(yǎng)基,
                                                                     3.將含不同濃度嘌呤霉素(1ug/mL,2ug/mL,3ug/mL,4ug/mL,5 ug/mL,6ug/mL,7ug/mL)的新鮮培養(yǎng)基加入已鋪有細(xì)胞的24孔板,
                                                                     4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,
                                                                     5.每天觀察細(xì)胞的存活比例,

                                                                     6.最小的嘌呤霉素使用濃度就是從嘌呤霉素篩選開(kāi)始1-4d內(nèi)殺死所有細(xì)胞的最低篩選濃度。

                                                               

                                                               

                                                               

                                                              b.嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞
                                                                    1.第一天,將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按每孔0.05million鋪入24孔板,孵育過(guò)夜
                                                                    2.第二天,除去24孔板中舊的培養(yǎng)基,
                                                                    3.加入含嘌呤霉素(2ug/mL)的篩選培養(yǎng)基,孵育,
                                                                    4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,
                                                                    5.每天觀察細(xì)胞的存活比例,
                                                                    6.在同一時(shí)間點(diǎn)(2d)存活的細(xì)胞,即為轉(zhuǎn)染成功細(xì)胞,
                                                                    7.對(duì)篩選后的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。
                                                               

                                                              來(lái)源:鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司
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