二苯胺DNA比色法定量測定試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

二苯胺DNA比色法定量測定試劑是一種旨在通過二苯胺與DNA的特異性結(jié)合反應(yīng)，借助可見光波長的吸光峰值的變化，比色測定樣品中DNA的絕對含量或濃度的技術(shù)方法。其適用于各種原核生物和真核生物的細(xì)胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，簡易方便，無需樣品純化，定量準(zhǔn)確。

技術(shù)背景

二苯胺（diphenylamine）具有與DNA酸性水解脫嘌呤后釋放的脫氧核糖（deoxyribose）轉(zhuǎn)變的ω-羥基菊芋糖醛（ω-hydroxylevulinyl aldehyde）特異性反應(yīng)的功能，形成藍(lán)色復(fù)合物。但不與RNA的核糖 （ribose）反應(yīng)。通過可見光（600nm）吸收可以進(jìn)行定量分析。因此避免了A260測定的種種限制，例如對樣品的純化要求、對DNA的單鏈雙鏈的要求和對紫外光UV的需求，以及RNA的干擾。

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）  8毫升

分解液（Reagent B）  8毫升

反應(yīng)液（Reagent C） 25毫升

穩(wěn)定液（Reagent D）     125微升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）       200微升

產(chǎn)品說明書                     1份

保存方式

保存穩(wěn)定液（Reagent D）和標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；其中反應(yīng)液（Reagent C）和穩(wěn)定液（Reagent D），具有腐蝕性，注意操作安全，且避免光照，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

恒溫水槽：用于反應(yīng)物孵育

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度儀：用于樣品比色測定

實(shí)驗(yàn)步驟

• 測定準(zhǔn)備
• 準(zhǔn)備好待測樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好分光光度儀：波長600nm，并置零
• 準(zhǔn)備好9個1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至9號管
• 按照下表配制標(biāo)準(zhǔn)液
• 放進(jìn)冰槽里備用，避免光照

二、比色測定

實(shí)驗(yàn)開始前，小心移取6毫升反應(yīng)液（Reagent C）和30微升穩(wěn)定液（Reagent D）到15毫升錐形離心管，混勻后，標(biāo)記為反應(yīng)工作液，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 準(zhǔn)備至少10個新的1.5毫升離心管作為測定管：標(biāo)記9個標(biāo)準(zhǔn)管和1個待測樣品管
• 分別加入140微升緩沖液（Reagent A）到每一個標(biāo)準(zhǔn)管和樣品管
• 分別加入10微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent E）到相應(yīng)測定管里（注意：濃度和管號對號入座）
• 加入10微升待測樣品到樣品管里
• 分別加入150微升分解液（Reagent B）到所有測定管里
• 放進(jìn)70℃干式恒溫槽或恒溫水槽孵育20分鐘
• 在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
• 分別加入600微升含有反應(yīng)液（Reagent C）和穩(wěn)定液（Reagent D）的反應(yīng)工作液到所有測定管里
• 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱（暗室環(huán)境）孵育5小時
• 即刻分別移入到1毫升比色皿，放進(jìn)分光光度儀讀數(shù)：獲得吸光讀數(shù)
• 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光單位（OD）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)DNA濃度（微克/10微升）
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)DNA濃度（微克/10微升）
• 樣品實(shí)際DNA濃度：

[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)DNA濃度（微克/10微升）X樣品稀釋倍數(shù)]÷100＝微克/毫升

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次樣本操作
• 操作時，須戴手套
• 系統(tǒng)操作時，標(biāo)準(zhǔn)樣品測定只需1次
• 反應(yīng)液（Reagent C）、穩(wěn)定液（Reagent D）和反應(yīng)工作液，避免光照
• 操作時注意安全，尤其在使用反應(yīng)液（Reagent C）、穩(wěn)定液（Reagent D）和反應(yīng)工作液時，十分小心
• 待測樣品無需純化，包括去蛋白、去RNA等處理
• 計算實(shí)際濃度時，不要忘記待測樣品的稀釋倍數(shù)
• 使用無水乙醇清洗比色皿
• 本公司提供系列DNA定量分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定定量準(zhǔn)確