真菌/酵母樣品細胞細胞周期碘化丙啶紅色熒光流式細胞分析試劑盒使用說明
真菌/酵母細胞樣品細胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）紅色熒光
流式細胞分析試劑盒產品說明書（中文版）
主要用途
YIJI真菌/酵母細胞樣品細胞周期碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）紅色熒光流式細胞分析試劑是一種旨在通過細胞流式儀測定真菌/酵母細胞中DNA結合碘化丙啶染料程度，來定量DNA含量，以進一步獲取細胞周期分布狀況的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種真菌/酵母細胞，包括芽殖酵母、裂殖酵母等的細胞周期分析�？梢员挥糜诩毎蛲�、信號傳遞、細胞分裂、代謝等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，分辨率高，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
技術背景
芽殖酵母（Saccharomyces cerevisiae）、裂殖酵母（Schizosacchromyces pombe）是研究真核生物細胞周期的模式生物。細胞周期是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。通過DNA結合染料，借助細胞流式儀，測定出DNA含量，根據DNA含量隨著細胞周期的不同而發(fā)生變化，來確定和區(qū)別細胞周期的不同階段。流式細胞術（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發(fā)展起來的集計算機、激光、流體力學、細胞化學、細胞免疫學為一體的高科學技術。凋亡細胞是在正常G0/G1峰細胞群前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）細胞群。
產品內容
YIJI清理液（Reagent A） 200毫升
YIJI固著液（Reagent B） 100毫升
YIJI抗干擾液（Reagent C） 25毫升
YIJI酶解液（Reagent D） 10毫升
YIJI染色液（Reagent E） 25毫升
產品說明書 1份
保存方法
保存YIJI抗干擾液（Reagent C）、YIJI酶解液（Reagent D）和YIJI染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent E）避免光照，有效保證6月
用戶自備
2毫升離心管：用于細胞染色的容器
（微型）臺式離心機：用于樣品操作操作
培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于反應孵育
細胞流式儀：用于細胞熒光分析
實驗步驟
- 準備好5 X 106的待測真菌/酵母細胞
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去上清液
- 加入1毫升YIJI清理液（Reagent A）到2毫升離心管，混勻
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去上清液
- 緩慢加入2毫升預冷的YIJI固著液（Reagent B），且渦旋震蕩混勻
- 放進4℃冰箱里孵育16小時
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去固著液
- 加入1毫升YIJI清理液（Reagent A），混勻
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去上清液
- 重復實驗步驟11至13一次
- 加入500微升YIJI抗干擾液（Reagent C），混勻
- 放進37℃恒溫水槽，孵育2至16小時
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去上清液
- 加入200微升YIJI酶解液（Reagent D），混勻
- 放進37℃恒溫水槽，孵育20分鐘
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混勻
- 放進微型臺式離心機離心1分鐘，速度為16000g
- 小心抽去上清液
- 加入500微升YIJI染色液（Reagent E），混勻細胞顆粒群
- 超聲處理100瓦，30%功率，15秒
- 在暗室里37℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘
- 移入到細胞流式儀專用測試管（可放進4℃冰箱里待測）
- 即刻進行細胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光出現(xiàn)紅色熒光（或488nm激發(fā)波長，610nm散發(fā)波長），觀察50000個細胞以上
注意事項
- 本產品為50次操作
- 操作時，須戴手套
- 孵育時，必須避免光照
- 建議細胞染色完成后，即刻進行細胞流式儀分析。如果放進4℃冰箱里待測，不要超過1周
- 細胞流式儀分析前，須混勻內容物，或超聲處理，避免細胞成團
- 細胞檢測量不得少于10000個
- 告知流式儀技術員有關細胞類型
- 使用未經染色的細胞進行FSC與SSC設定，然后將染色細胞調整到未經染色細胞的水平，包括FL1、FL2、FL3的PMT
- 建議設定：
Detector FSC E00 Gain：3
Detector FL2-A Voltage：890 Gain：2
流速：500/秒
- 本公司提供系列細胞周期分析試劑產品
質量標準
- 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
- 本產品經鑒定熒光清晰
