組織硫化氫含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

組織硫化氫含量比色法定量檢測試劑是一種旨在通過堿性苦味酸與肌酐反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物所呈現(xiàn)的吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中硫化氫含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良亞甲基藍(lán)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人體、動(dòng)物組織裂解樣品等硫化氫水平檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

硫化氫（hydrogen sulfide；H2S）是一種自然發(fā)生的，具有腐蝕性和可燃性，不穩(wěn)定的易被氧化的無色氣體，為半胱氨酸脫硫（desulfuration）代謝產(chǎn)物，是第三個(gè)生理性氣體信使分子（messenger molecule）或氣體傳導(dǎo)分子（gasotransmitter），存在于腦、心臟、肺、肝、小腸、胰腺以及海綿體（cavernosum）組織等，其中腦組織含量較低，腎組織含量較高。神經(jīng)系統(tǒng)的胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）和心血管系統(tǒng)的胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase；CGL）是參與內(nèi)源性硫化氫生成的主要成員。一旦機(jī)體缺氧，硫化氫含量即增高。硫化氫旨在調(diào)節(jié)組織內(nèi)含硫氨基酸的水平，具有心血管系統(tǒng)的生理功能和病理生理調(diào)節(jié)作用，例如誘導(dǎo)血管平滑肌松弛，血管擴(kuò)張（vasodilation），致血壓下降，以及促炎性作用。同時(shí)硫化氫具有毒性作用，會(huì)造成嗅覺神經(jīng)迅速癱瘓，抑制細(xì)胞色素C氧化酶，增加線粒體膜通道孔開放，引起心臟、小腸、生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)平滑肌過度松弛，而產(chǎn)生器官損傷、低血壓、心動(dòng)過緩（bradycardia）等癥狀。在自然環(huán)境中，硫化氫是硫循環(huán)（sulfur cycle）的主要中間產(chǎn)物，包括有機(jī)硫化物的礦物化或分解、微生物的同化作用，以及氧化還原。作為化學(xué)窒息性（asphyxiant）氣體，硫化氫對(duì)于魚類和其它水生動(dòng)物具有毒性作用，同時(shí)也是細(xì)菌污染的標(biāo)志。使用醋酸鋅（zinc acetate）在堿性條件下，捕獲硫化氫，形成穩(wěn)定的硫化鋅沉淀；在酸性條件下，溶解的硫化鋅與催化劑對(duì)氨基二甲基苯胺（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine）和氯化鐵（ferric chloride）反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色的亞甲基藍(lán)（methylene blue），通過其終點(diǎn)吸收峰值的變化（670nm波長），來定量分析硫化氫的含量。                      

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A） 毫升
穩(wěn)定液（Reagent B） 毫升
去干擾液（Reagent C） 毫升
反應(yīng)液（Reagent D）   毫升
顯色液（Reagent E）   毫升
標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）   毫升
產(chǎn)品說明書    1份

保存方式

保存反應(yīng)液（Reagent D）和GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在在4℃冰箱里；反應(yīng)液（Reagent D）避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

樣品準(zhǔn)備

• 手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定200毫克組織重量  
• （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
• 加入預(yù)冷的xx毫升清理液（Reagent A）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40至80下） 
• 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g
• 移取500微升到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
• 放在冰槽里待測（注意：須1周內(nèi)使用）

標(biāo)準(zhǔn)樣品準(zhǔn)備

• 移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
• 放在冰槽里待測

測定準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好待測樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好分光光度儀：波長670nm，并置零

樣品測定

• 移取xx微升去干擾液（Reagent C）到上述待測樣品或標(biāo)準(zhǔn)樣品管里，混勻
• 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent D）
• 加入xx微升顯色液（Reagent E），混勻
• 室溫下孵育20分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心3分鐘，速度為5000g
• 移取1毫升上清液到比色皿
• 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測，獲得待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品讀數(shù)

四、計(jì)算樣品濃度

轉(zhuǎn)化為組織實(shí)際硫化氫含量

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)樣品
• 本產(chǎn)品檢測范圍在0.1毫克/升（10微摩爾/升）至8.5毫克/升（250微摩爾/升）
• 操作時(shí)，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 系統(tǒng)操作過程中，標(biāo)準(zhǔn)樣品測定只需1次
• 試劑出現(xiàn)沉淀可以離心去除后檢測
• 測定值由低到高變化
• 用戶可以使用664nm至670nm波長范圍的任一波長進(jìn)行檢測
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品量
• 樣品中碘（iodine）大于2毫克/升、硫代硫酸鹽（thiosulfate）或亞硫酸鹽（sulfite）大于10毫克/升、氰亞鐵酸鹽等可能干擾檢測
• 硫化氫濃度換算：1毫克/升=29.4微摩爾/升
• 本公司提供系列生化學(xué)檢測試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感