伯齊推出納米流式巧選胞外囊泡最佳參考材料解決方案

胞外囊泡做為細(xì)胞間通訊的重要媒介，在細(xì)胞生理穩(wěn)態(tài)的維持方面和病理發(fā)生發(fā)展的過程中發(fā)揮著重要的作用，正漸漸成為基礎(chǔ)科學(xué)和臨床研究的一個(gè)主要研究對(duì)象。然而針對(duì)胞外囊泡的研究，在世界范圍內(nèi)一直缺乏相對(duì)統(tǒng)一的研究標(biāo)準(zhǔn)或大小評(píng)估參考材料。在以往的研究報(bào)道中，曾有文獻(xiàn)提出使用自然存在的，具有生物特性的參考材材料（如病毒顆粒和脂質(zhì)體）作為胞外囊泡研究的參考材料。然而，這些材料的各種理化特性與胞外囊泡的生物特性還相距甚遠(yuǎn)。
 
近日，芬蘭科學(xué)家Valkonen S和其合作者的研究工作，為胞外囊泡參考材料的發(fā)掘工作提供了新的思路。研究人員，通過查取文獻(xiàn)和調(diào)查問卷（圖1），以及實(shí)驗(yàn)測(cè)試，成功找到一種名為Nanoerythrosomes (Nano E)的胞外囊泡參考材料。其中，Nano E是研究人員利用特殊方法破裂紅細(xì)胞過程中產(chǎn)生的囊泡。這種Nano E擁有更加接近細(xì)胞源性胞外囊泡（如紅細(xì)胞自然產(chǎn)生的胞外囊泡eryEVs）的折射率（RI=1.37），更加適合做囊泡大小評(píng)估的尺寸(Nano E的大小尺寸絕大多數(shù)分布在200nm左右)（圖2），更加適合做熒光標(biāo)記的特性等特點(diǎn)（圖3）。這項(xiàng)創(chuàng)新性的研究工作，為加快胞外囊泡研究領(lǐng)域建立統(tǒng)一研究體系，促進(jìn)該領(lǐng)域研究成果的可借鑒性以及臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化的進(jìn)程，奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

在該項(xiàng)研究成果中，其中一項(xiàng)引人注目的工作是：研究人員利用胞外囊泡分析最常用的流式分析法，借助英國Apogee超靈敏納米流式分析儀A50 Micro，成功完成對(duì)Nano E各參數(shù)的分析（如在分析熒光標(biāo)記的過程中，同時(shí)監(jiān)測(cè)各Nano E的大小）。這些工作的順利完成，主要?dú)w功于A50-Micro超高的散射光靈敏度（最小檢測(cè)80nm的材料）和精細(xì)的分辨率（10nm）-克服了傳統(tǒng)流式散射光檢測(cè)的限制（檢測(cè)下限為500nm，在分析占有絕大部分比例500nm以下囊泡時(shí)會(huì)面臨極大挑戰(zhàn)）。這種技術(shù)優(yōu)勢(shì)，使Apogee A50 Micro不僅是只借助散射光就可精確分析胞外囊泡（100-1000nm）以及相應(yīng)的參考材料，同時(shí)還可為熒光標(biāo)記檢測(cè)提供必不可少的參考信息。因此，Apogee A50 Micro 已被歐洲國家計(jì)量研究協(xié)會(huì)評(píng)定為檢測(cè)胞外囊泡的最靈敏分析系統(tǒng)。由于傳統(tǒng)流式檢測(cè)法，通常借助熒光標(biāo)記來對(duì)進(jìn)行信息表征屬，同時(shí)所分析樣品中難免會(huì)有對(duì)熒光標(biāo)記產(chǎn)生非特異干擾的細(xì)胞碎片或膜脂類物質(zhì)，因此，利用熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)囊泡，如果想獲得精確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，借助散射光信息來排除非特異性干擾物質(zhì)，將變得格外重要。此外，囊泡表面抗原表達(dá)豐度和抗原抗體結(jié)合效率也會(huì)限制胞外囊泡的熒光標(biāo)記檢測(cè)，這也將在很大程度上限制傳統(tǒng)流式的囊泡檢測(cè)應(yīng)用。由此可見，在分析胞外囊泡及相應(yīng)參考材料的研究體系中，Apogee超靈敏納米流式A50-Micro顯然已經(jīng)成為最理想的流式分析系統(tǒng)。

圖1，A:研究人員針對(duì)各參考微球所做的權(quán)重分析統(tǒng)計(jì)，其中參考材料的生化組成成分為最受關(guān)注 因素。B:最理想的生物參考材料物理生化特性。

圖 2，參考Apogee標(biāo)準(zhǔn)混合微球，用Apogee A50 Micro分析無熒光標(biāo)記的eryEVs和Nano E。其中縱坐標(biāo)代表綠色熒光標(biāo)記強(qiáng)度，橫坐標(biāo)代表 A50 Micro大角度散射光強(qiáng)度（用于評(píng)估樣本的大�。�。

圖 3，與eryEVs相比，Nano E更適合做CD235a抗體標(biāo)記。其中縱坐標(biāo)代表綠色熒光標(biāo)記強(qiáng)度，橫坐標(biāo)代表 A50 Micro收集的大角度散射光強(qiáng)度。

更多詳情請(qǐng)參考：
Valkonen S, Van d P E, B?ing A, et al. Biological reference materials for extracellular vesicle studies. [J]. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2016.

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