西歸對小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響

摘要：目的研究西歸對小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響。方法采用跳臺法、避暗法觀察西歸對東莨菪堿、亞硝酸鈉、乙醇所致小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙的影響。結(jié)果與模型組及溶劑組比較，西歸能明顯延長東莨菪堿、亞硝酸鈉、乙醇所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的潛伏期（戶＜０.０５或戶＜０.０１），并能降低錯誤次數(shù)（戶＜０.０５或／＞＜０.０１）。結(jié)論西歸具有改善小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙作用。��

關(guān)鍵詞：西歸；小鼠；學(xué)習(xí)記憶

西歸為傘形科屬植物西藏凹乳芹（設(shè)／Ａ／ＭＷｅＢｏｂｓ．）的根，又稱獨腳當(dāng)歸，其主要分布在中國的西部。在民間已有百余年的使用歷史，云南大理有人工栽培，當(dāng)?shù)厝擞闷渥鳛樽萄a(bǔ)蔬菜食用，鮮品也可生吃，風(fēng)味獨特。西歸氣芳香，味甘、微苦；具有補(bǔ)血、補(bǔ)氣、調(diào)經(jīng)等功效現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，西歸具有抗疲勞、抗缺氧、抗氧化等作用。但關(guān)于西歸對學(xué)習(xí)記憶功能障礙的研究，目前尚未有報道。本文將通過研究西歸對多種化學(xué)藥物所致學(xué)習(xí)記憶障礙的影響，為下一步開發(fā)研究西歸奠定理論基礎(chǔ)。

１材料與儀器

１．１材料

西歸，購于云南省大理州鶴慶縣馬廠鄉(xiāng)，經(jīng)大理學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室馬曉匡教授鑒定為傘形科植物西藏凹乳芹的根；人參皂苷（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ，　ＧＳ　），惠州市東方植物保健科技有限公司，批號：２００７０５１６；羧甲基纖維素鈉（ＣＭＣ－Ｎａ），淮南山河藥用輔料有限公司，批號０３０６０３；　９５％乙醇，購于大理博源化工；無水乙醇，天津市化學(xué)試劑一廠，批號：０６０８２４；氫溴酸東莨菪堿，上海禾豐制藥有限公司，批號：２００５０５１８；亞硝酸鈉，重慶化學(xué)試劑總廠，批號：９７０９２３。

１．２儀器

ＲＥ５２－０５旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；XR-3TB跳臺測試系統(tǒng)，上海欣軟信息科技有限公司；XR-XB110避暗系統(tǒng)，上海欣軟信息科技有限公司。

２動物

ＫＭ種小鼠，雌雄各半，體重１８￣２２ｇ，由四川省科學(xué)院省人民醫(yī)院實驗動物研究所提供，許可證號：ＳＣＸＫ（川）２００４－１５。

３方法

３．１西歸的提取及溶液的制備

３．１．１提取取干生藥西歸粗粉１０　０００．００ｇ，用９５％乙醇回流４次，然后合并濾液，經(jīng)減壓濃縮，最終得浸裔１７９８．２６ｇ，提取效率為１７．９８％，即１ｇ浸膏相當(dāng)于５．５６ｇ的生藥。

３．１．２ １％ＣＭＣ－Ｎａ的制備取適量的ＣＭＣ－Ｎａ，用純凈水配制到所需濃度。

３．１．３西歸溶液的制備１２１根據(jù)小鼠對西歸的最大給藥量為４０４．４　ｇ生藥．ｋｇ＿、ｄ＿、西歸高劑量、西歸中劑量、西歸低劑量分別為最大給藥量的１／５、１／１０、１／２０，即給藥劑量分別為８０．８８　ｇ.ｋｇ—１、４０．４４　ｇ.ｋｇ＇　２０．２２　ｇ.ｋｇ—１。以０．２　ｍＬ.（１０ｇ廣灌胃給藥，應(yīng)分別配制成７２．８％、３６．４％、１８．２％的西歸溶液。

３．１．４　１％　ＧＳ制備以ＧＳ給藥劑量２００　ｍｇ.ｋｇ＿１，給藥體積０．２　ｍＬ.（ｌＯｇＴ１，即應(yīng)配制１％的ＧＳ溶液。�。保�００�牐绲模牵�，用純凈水配制到所需濃度。

３．１５　１２％亞硝雜制備以亞硝麵給藥劑量１２０　ｍｇ．　ｋｇ＇給藥容量０．１　ｍＬ＊　（１０　ｇ）＇即應(yīng)配制１．２％的亞硝酸鈉溶液。�。保�２０�牐绲膩喯跛徕c，用純凈水配制到所需濃度。

３．１．６　４０％乙醇制備取無水乙醇２０　ｍＬ，用純凈水稀釋到所需濃度。

３．２西歸對乙醇所致記憶再現(xiàn)陣碎的彩響

３．２．１跳臺法�。耍头N小鼠８４只，雌雄各半，隨機(jī)分成７組，分別為正常組、模型組、溶劑組、西歸高劑量組、西歸中劑量組、西歸低劑量組及人參皂苷組，各組每天灌胃１次，連續(xù)給藥６　ｄ，其中正常組、模型組分別給予等體積的生理鹽水，溶劑組給予等體積的溶劑。于末次給藥后１　ｈ，先讓小鼠在跳臺儀中適應(yīng)３　ｍｉｎ，然后在電流0.4mA下訓(xùn)練５　ｍｉｎ。于訓(xùn)練后２４　ｈ　（在測試前１　ｈ，再給１次藥）。正常組給予等體積的生理鹽水，其余各組均灌胃４０％乙醇０．１　ｍＬ　＿　（１０　ｇ）＇　３０　ｍｉｎ后測試（開始測試時，將小鼠放在平臺上），記錄小鼠在５ｍｉｎ內(nèi)的潛伏期及錯誤次數(shù)。

３．２＿２避暗法取ＫＭ種小鼠７７只，動物分組、給藥時間、給藥方法及給藥劑量均同跳臺法，于末次給藥后１　ｈ，開始訓(xùn)練（先讓小鼠適應(yīng)環(huán)境３　ｍｉｎ，然后在0.4mA的電流下訓(xùn)練５　ｍｉｎ　）。于訓(xùn)練后２４　ｈ（在測試前１　ｈ，再給１次藥），正常組給予等體積的生理鹽水，其余各組灌胃４０％乙醇Ｏ．ｌｍＬ.（１０　ｇ）＇　３０ｍｉｎ后測試（把動物放人明室，背朝洞口），記錄小鼠在５ｍｉｎ內(nèi)的潛伏期及錯誤次數(shù)。

３．３西歸對東茛菪減所致記憶獲得陣碎的影響

３．３．１跳臺法取ＫＭ種小鼠８４只，雌雄各半，隨機(jī)分成７組，分別為正常組、模型組、溶劑組、西歸高劑量組、西歸中劑量組、西歸低劑量組及人參皂苷組，各組每天灌胃一次，連續(xù)給藥６　ｄ，其中正常組、模型組分別給予等體積的生理鹽水，溶劑組給予等體積的溶劑。于末次給藥后４５　ｍｉｎ，西歸各組及模型組小鼠腹腔注射２　ｍｇ.ｋｇ—１氫溴酸東莨菪堿，正常組腹腔注射等體積生理鹽水，１５　ｍｉｎ后開始訓(xùn)練（先讓小鼠在跳臺儀中適應(yīng)３　ｍｉｎ，然后在電流0.4mA下訓(xùn)練５　ｍｉｎ　）。２４　ｈ后開始測試（于測試前１　ｈ，再給１次藥），開始測試時，把小鼠放在平臺上，并記錄小鼠在電流0.4mA下５　ｍｉｎ內(nèi)的潛伏期及錯誤次數(shù)。

３．３．２避暗法�。耍头N小鼠７７只，動物分組、給藥時間、給藥方法及給藥劑量均同跳臺法，于末次給藥后４５　ｍｉｎ，西歸各組及模型組腹腔注射２　ｍｇ.ｋｇ－１氫溴酸東莨菪堿，正常組腹腔注射等體積生理鹽水，１５　ｍｉｎ后開始訓(xùn)練（把�嵭∈蠓湃吮馨祪x適應(yīng)環(huán)境３　ｍｉｎ，然后在電流0.4mA下訓(xùn)練５ｍｉｎ　）。２４　ｈ后開始測試（于測試前１　ｈ，再給１次藥），開始測試時，把動物放人明室，背朝洞口，并記錄小鼠在電流0.4mA下５ｍｉｎ內(nèi)的潛伏期及錯誤次數(shù)。

３．４西歸對亞硝狻鈉所致記憶鞏固障碎的影響

３．４．１跳臺法�。耍头N小鼠８４只，雌雄各半，隨機(jī)分成７組，分別為正常組、模型組、溶劑組、西歸高劑量組、西歸中劑量組、西歸低劑量組及人參阜苷組，各組每天灌冑１次，連續(xù)給藥６　ｄ，其中正常組、模型組分別給予等體積的生理鹽水，溶劑組給予等體積的溶劑。于末次給藥后１　ｈ，開始訓(xùn)練（先讓小鼠在跳臺儀中適應(yīng)３　ｍｉｎ，然后在電流0.4mA下訓(xùn)練５ｍｉｎ）。訓(xùn)練后，西歸各組及模型組立即皮下注射１２０　ｍｇ.ｋｇ＿ｌ亞硝酸鈉，正常組皮下注射等體積的生理鹽水，２４　ｈ后開始測試（于測試前１ｈ，再給１次藥），開始測試時，把小鼠放在平臺上，并記錄小鼠在電流0.4mA下５　ｍｉｎ內(nèi)的潛伏期及錯誤次數(shù)。

３．４．２避暗法取ＫＭ種小鼠７７只，動物分組、給藥時間、給藥方法及給藥劑量均同跳臺法，于末次給藥后１　ｈ，開始訓(xùn)練（把小鼠放入避暗儀適應(yīng)環(huán)境３　ｍｉｎ，然后在電流0.4mA下訓(xùn)練５ｍｉｎ　）。訓(xùn)練后，給藥組及模型組立即皮下注射１２０　ｍｇ.ｋｇ－１亞硝酸鈉，正常組皮下注射等體積的生理鹽水。２４　ｈ后開始測試（于測試前１　ｈ，再給１次藥），開始測試時，把動物放人明室，背朝洞口，并記錄小鼠在電流0.4mA下５ｍｉｎ內(nèi)的潛伏期及錯誤次數(shù)。

３．５統(tǒng)計方法

采用ＳＰＳＳ　１３．０軟件包中方差分析ＬＳＤ法統(tǒng)計分析潛伏期，用Ｇａｍｅｓ－Ｈｏｗｅｌｌ法統(tǒng)計分析錯誤次數(shù)。

４討論

學(xué)習(xí)記憶是構(gòu)成大腦最高機(jī)能一智能的要素，在智能發(fā)展過程中起決定性作用。學(xué)習(xí)是指新行為（經(jīng)驗）的獲得和發(fā)展，記憶則是通過學(xué)習(xí)獲得經(jīng)驗的保持和再現(xiàn)。學(xué)習(xí)記憶是一個非常復(fù)雜的神經(jīng)活動過程，它與腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)（主要是乙酰膽堿）、腎上腺素、５－羥色胺及氧等物質(zhì)密切相關(guān)，而這些物質(zhì)腦內(nèi)缺乏可引起學(xué)習(xí)記憶獲得、鞏固及再現(xiàn)障礙。目前，由東莨菪堿、亞硝酸納和乙醇所致學(xué)習(xí)記憶獲得、鞏固及再現(xiàn)障礙是公認(rèn)的學(xué)習(xí)記障礙工具藥物。

近年來，西歸的藥理學(xué)研究表明，西歸具有抗疲勞、抗缺氧的作用　。而抗疲勞、抗缺氧可促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶的作用因此，認(rèn)為西歸可能具有促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶的作用。通過跳臺、避暗兩種實驗方法，研究西歸對東莨菪堿、亞硝酸鈉和乙醇所致小鼠學(xué)習(xí)記憶獲得、鞏固及再現(xiàn)障礙的影響。實驗結(jié)果顯示，西歸能明顯提高東茛菪堿、亞硝酸納、乙醇所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的潛伏期，并能降低錯誤次數(shù)，說明西歸具有改善學(xué)習(xí)記憶的作用。其作用機(jī)制可能與促進(jìn)了中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)活動、抗腦缺血缺氧等有關(guān)。但學(xué)習(xí)記憶是一個復(fù)雜的生理過程，因此要具體的了解西歸促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶作用機(jī)制，還有待于進(jìn)—步研究。