多肽合成的原理與步驟

  導(dǎo)讀：多肽合成是一個重復(fù)添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端（羧基端）向N端（氨基端）合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。 培養(yǎng)基 古朵生物 微生物細(xì)胞

    1.1多肽合成基本原理：

    先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基以共價鍵的結(jié)構(gòu)同一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基酸作為氨基組份經(jīng)過脫去氨基保護基并 同過量的活化羧基組分反應(yīng)，接長肽鏈。重復(fù)（縮合→洗滌→去保護→中和及洗滌→下一輪縮合）操作，達到所要合成的肽鏈長度，最后將肽鏈從樹脂上裂解下來， 經(jīng)過純化等處理，即得所要的多肽。其中α-氨基用BOC（叔丁氧羰基）保護的稱為BOC固相合成法，α-氨基用FMOC（9-芴甲氧羰基）保護的稱為 FMOC固相合成法。

    1.2固相多肽合成的步驟：

    A，樹脂的選擇及氨基酸的固定

    用于多肽合成的高分子的載體主要有3類：交聯(lián)聚苯乙烯；聚酰胺：聚乙烯一乙二醇脂類樹脂。氨基酸的固定主要是通過保護的氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團之間形成共價鍵來實現(xiàn)。

    B，氨基、羧基、側(cè)鏈的保護及脫除

    要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽，需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護，同時對氨基酸側(cè)鏈上的活性基團也要保護，反應(yīng)完成后再將保護基團 除去，近年來，F(xiàn)MOC合成法得到了廣泛的應(yīng)用。羧基通常用形成酯基的方法進行保護。甲酯和乙酯是逐步合成中保護羧基的常用方法。

    C，成肽反應(yīng)

    固相中的成肽反應(yīng)一般是將兩個相應(yīng)的氨基被保護的及羧基被保護的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵，要形成酰胺鍵，經(jīng)常用的手段是將羧基活化，變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的縮合劑（如碳二亞氨）形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。

    D，裂解及合成肽鏈的純化

    BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護基，F(xiàn)MOC法直接用TFA，有時根據(jù)條件不同，其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采用。合成肽鏈進一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等。