中華眼鏡蛇心臟毒素（CTX）對疼痛及記憶的影響

(此研究來自于華東師范大學劉華清等人)

摘要:通過熱板法及醋酸扭體法觀察中華眼鏡蛇心臟毒素(CTX)對成年昆明種小鼠疼痛的影響，通過Y型電迷宮及穿梭箱法研究CTX對東蓖若堿誘發(fā)成年昆明種小鼠學習記憶障礙的影響，利用跳臺法研究CTX對東蓑若堿誘發(fā)成年BABL/C小鼠學習記憶障礙的影響，利用Morris水迷宮法研究CTX對東蓖若堿誘發(fā)成年C57BL/6J小鼠學習記憶障礙的影響。實驗發(fā)現(xiàn)，CTX能明顯增加熱刺激引起的疼痛閉值，明顯減少醋酸引起的扭體次數(shù)，并能顯著增加小鼠在Y型迷宮實驗中的正確反應次數(shù)，減少在穿梭箱實驗中小鼠重新訓練至學會標準的訓練次數(shù)及小鼠的反應時間，能增加小鼠在跳臺法中的潛伏期，減少錯誤反應次數(shù)，減少小鼠在Morris水迷宮實驗中的尋臺時間和游泳路程，以上效果均表現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。以上結果提示，CTX有良好的鎮(zhèn)痛作用以及對東莫若堿誘發(fā)的小鼠學習記憶障礙的改善作用，這可能是由于CTX與眼鏡蛇神經(jīng)毒素(NT)三維結構相似而導致了相似的生物學效應。

一.實驗方法

1.Y型電迷宮法

昆明種小鼠雌雄各半。Y型電迷宮底部通以35v交流電，以小鼠受電擊后直接逃至左

側安全區(qū)為正確反應，以小鼠連續(xù)10次中反應正確8次為訓練至學會的標準。24h后，將已經(jīng)學會的小鼠隨機分組，各組間達到學會標準的訓練次數(shù)不存在顯著性差異(P>0.05) o于測試前45min給藥，空白組與模型組ip生理鹽水，陽性組ip 0.1mg/kg HupA,CTXl,CTX2,CTX3組分別ip CTX 0.03,0.06,0.12mg/kg，測試前30min除空白組外其余5組均按5mg/kg體重給藥劑量ip東蓑若堿。測試記憶成績，以固定測試10次中的正確次數(shù)作為評價指標。（Y型迷宮視頻分析系統(tǒng)由上海欣軟信息科技有限公司提供，Y迷宮分為食物獎賞型和電刺激型，因不同的實驗需要提供不同的實驗裝置）。

2.穿梭箱法

昆明種小鼠雌雄各半。以蜂鳴聲刺激為信號，延遲5s以后同側施加35v交流電刺激。

小鼠在蜂鳴聲開始后5s之內(nèi)到達安全區(qū)為正確反應。訓練至小鼠在連續(xù)5次中正確4次為學會的標準。24h后，將已學會的小鼠隨機分成6組，各組間達到學會標準的訓練次數(shù)不存在顯著性差異(P>0.05)。給藥方法與Y型電迷宮方法相同。記錄下每只小鼠從蜂鳴聲開始到到達安全區(qū)的時間作為反應時，以反應時和重新訓練至5次中正確4次所需要的訓練次數(shù)作為評價指標。（穿梭箱視頻分析系統(tǒng)由上海欣軟信息科技有限公司提供，上海欣軟獨家研發(fā)的SuperAPAS穿梭箱視頻分析系統(tǒng)采用了最先進的識別算法，根據(jù)不同的實驗環(huán)境采用不同的識別算法，與其它穿梭視頻分析軟件相比，SuperAPAS穿梭箱視頻分析系統(tǒng)具有準確率高、能夠適應不同的實驗環(huán)境、測試指標多等特點）

3.跳臺法

BABL/C小鼠雌雄各半，訓練小鼠在平臺上3min不接觸底部銅柵為學會的標準。24h后將已學會的小鼠隨機分組，各組間達到學會標準的訓練次數(shù)不存在顯著性差異(P>0.05)。給藥方法與Y型電迷宮方法相同。小鼠在測試中第一次接觸底部銅柵的時間作為潛伏期，小鼠在5min內(nèi)接觸銅柵受到電擊的次數(shù)為錯誤次數(shù)，以潛伏期和錯誤次數(shù)作為評價指標。（跳臺儀器由上海欣軟信息科技有限公司提供，目前該儀器已被廣大高校和醫(yī)療所采用，效果反響良好）

4.Morris水迷宮法

Morris水迷宮，直徑74cm，深度為48cm，小鼠站立平臺的直徑為7.3cm，平臺高度24cm，實驗時水深為25cm。用新鮮奶粉將水調(diào)至不透明狀[ys)0實驗采用C57BL/6J小鼠，雌雄各半，先將小鼠放置于平臺上30s。將小鼠分別面朝壁放人水中，至尋找到平臺，并在平臺上停留30s。每只小鼠允許最長游泳時間為120s，超過120s則用篩引導至平臺，并停留30s。每只小鼠每天訓練4次(分別以迷宮4個不同象限為出發(fā)點)，每次間隔30s。記錄小鼠尋臺時間，作為學習成績。連續(xù)訓練5天后，按學習成績將小鼠分為6組，每組10只。各組間尋臺時間不存在統(tǒng)計學差異(P>0.05)。給藥方法與Y型電迷宮方法相同。將所有小鼠從同一起點(與平臺所在位置相對)出發(fā)，記錄尋臺時間，游泳路程。 所有數(shù)據(jù)以x士S表示，以t檢驗統(tǒng)計組間差異。（Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)由上海欣軟信息科技有限公司提供，上海欣軟的水迷宮占據(jù)了市場的大壁江山，該款水迷宮采用最先進的ABS工程塑料，與不銹鋼和鐵皮等材料相比，具有輕便性、韌性好、保溫系數(shù)高、不生銹、易清洗等特點而受到了廣大科研人員的青睞嗎，而其獨有的Supermaze視頻分析系統(tǒng)采用了國內(nèi)頂尖的識別算法，提高了實驗的準確性）

三.實驗結果

CTX 0.06mg/kg與0. 12mg/kg組的小鼠Y型電迷宮實驗中的正確次數(shù)明顯高于模型組(P<0.O1)，其中CTX 0, 12mg/kg組小鼠的正確次數(shù)與陽性對照組相似(P>0.05) o

CTX 0.06mg/kg與0.12mg/kg組的小鼠在穿梭箱實驗中的反應時間與記憶重現(xiàn)所需的訓練次數(shù)也明顯低于模型組(P<0.O1)，其中CTX 0.12mg/kg組的小鼠記憶成績與陽性對照組相當(P>0.05)。在跳臺法實驗中，CTX 0.06mg/kg與0.12mg/kg組的小鼠在潛伏期明顯高于模型組(P<0.O1)，而錯誤次數(shù)顯著低于模型組(P<0.O1) , CTX 0.12mg/kg組的小鼠記憶成績與陽性對照組相當(P>0.05) o CTX 0.06mg/kg與0.12mg/kg組的小鼠在水迷宮實驗中的尋臺時間和游泳路程都明顯低于模型組(P<0.O1) , CTX 0.12mg/kg組的小鼠記憶成績與陽性對照組相當(P>0.05)。以上結果均表現(xiàn)出劑量依賴性。