常見(jiàn)細(xì)胞增殖檢測(cè)方法總結(jié)
常見(jiàn)細(xì)胞增殖檢測(cè)方法總結(jié)
優(yōu)寧維流式網(wǎng)
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細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞；同時(shí)，多細(xì)胞生物可以由一個(gè)受精卵，經(jīng)過(guò)細(xì)胞的分裂和分化，最終發(fā)育成一個(gè)新的多細(xì)胞個(gè)體。必須強(qiáng)調(diào)指出，通過(guò)細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去�？梢�(jiàn)，細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。
一、MTT
又稱(chēng)MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測(cè)。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲瓚的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害。
產(chǎn)品訂購(gòu)信息：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝規(guī)格 |
| 4890-025-K | MTT Cell Proliferation/Viability Assay | 2500tests |
| K299-1000 | MTT Cell Proliferation Assay Kit (Colorimetric | 1000tests |
二、CCK-8
Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。
CCK-8的原理跟MTT其實(shí)是相同的，不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機(jī)溶劑溶解這個(gè)步驟，因此可以減少一定的誤差。其他優(yōu)點(diǎn)就是重復(fù)性優(yōu)于MTT；對(duì)細(xì)胞毒性��；為1瓶溶液，不需預(yù)制，即開(kāi)即用。
產(chǎn)品訂購(gòu)信息：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝規(guī)格 |
| CK04-500 | Cell Counting Kit-8 | 500tests |
| CK04-100 | Cell Counting Kit-8 | 100tests |
三、BrdU
Brdu，即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細(xì)胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細(xì)胞。同時(shí)結(jié)合其它細(xì)胞標(biāo)記物，雙重染色，可判斷增殖細(xì)胞的種類(lèi)，增殖速度，對(duì)研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)有重要意義。
但由于抗體分子量大，難于摻入并被有效檢測(cè)，因此BrdU檢測(cè)需采用DNA酶或HCl或加熱使DNA變性；這些處理方法會(huì)破壞抗原識(shí)別位點(diǎn)，此外許多細(xì)胞周期分析的染料都需要dsDNA，這種處理方法也使得同一樣本無(wú)法同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞周期分析。對(duì)于植物細(xì)胞等有細(xì)胞壁的分析，采用抗體檢測(cè)還需要消化細(xì)胞壁，細(xì)胞壁消化酶常含有一些雜質(zhì)，會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的可靠性降低，同時(shí)BrdU檢測(cè)則需要進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的孵育--幾個(gè)小時(shí)甚至過(guò)夜。
產(chǎn)品訂購(gòu)信息：
四、EdU
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝規(guī)格 |
| 559619 | FITC BrdU Flow Kit | 50tests |
| 552598 | APC BrdU Flow Kit | 50tests |
| K306-200 | BrdU Cell Proliferation Assay Kit | 200tests |
四、EdU
EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類(lèi)似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過(guò)基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究，尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。
與BrdU檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無(wú)需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無(wú)需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性。
其他增殖檢測(cè)訂購(gòu)信息：
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 包裝規(guī)格 |
| K305-1000 | EZViable™ Calcein AM Cell Viability Assay Kit (Fluorometric) | 1000tests |
| K300-500 | MTS Cell Proliferation Colorimetric Assay Kit | 500tests |
| K303-500 | VisionBlue™ Quick Cell Viability Fluorometric Assay Kit | 500tests |
| K302-500 | WST Cell Proliferation Colorimetric Assay Kit plus | 500tests |
| K301-500 | WST-1 Cell Proliferation Colorimetric Assay Kit | 500tests |
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