1．4  儀器   Morris 水迷宮，北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司; 萬分之一分析天平，Sartorius，德國; -80℃ 冰箱，Thermo，美國。

 1.5 方法 大鼠進(jìn)行隨機(jī)分成 5 組，分別為老年組、銀杏黃酮 陽性組、覆盆子乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組，另設(shè)青年組( 為 3個(gè)月齡的 SD 大鼠) 。青年組和老年組灌胃生理鹽水 1m1 /100g，乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組分別灌胃給予覆盆子相應(yīng)萃取部12g 生藥 / kg，銀杏黃酮陽性組給予銀杏黃酮 5． 785mg / kg，給藥 容量 1m1 /100g，連續(xù) 1 個(gè)月。

1．5．1 定位航行試驗(yàn) 共 5 天，面向池壁將大鼠分別從三個(gè)不 同象限的入水點(diǎn)放入水中，記錄其在 60 秒內(nèi)尋找到平臺(tái)所用的 時(shí)間，此是逃避潛伏期( escape latency) 。大鼠如果 60 秒內(nèi)找不 到平臺(tái)則由實(shí)驗(yàn)操作者牽引實(shí)驗(yàn)大鼠停留在平臺(tái)上 10 ～ 15s，參與文獻(xiàn)［4］進(jìn)行。

 1．5．2  空間探索試驗(yàn)  實(shí)驗(yàn)第 6 天，撤除平臺(tái)，任意選擇 1 個(gè)

入水點(diǎn)將大鼠放入水中，記錄其 60 秒內(nèi): 動(dòng)物穿越虛擬平臺(tái)的 次數(shù); 空間探索試驗(yàn)中在原平臺(tái)所在象限活動(dòng)時(shí)間和動(dòng)物在目 標(biāo)象限( 原平臺(tái)所在象限) 游泳路程。

1.5．3 乙酰膽堿酯酶、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè) 水迷宮實(shí)驗(yàn) 結(jié)束后，取腦組織，進(jìn)行組織勻漿，制成 10% 的勻漿液，檢測(cè)乙 酰膽堿酯酶、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性，具體方法按試劑盒說明書進(jìn)行。

 1．5．4 總超氧岐化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶活性 及丙二醛含量檢測(cè) 取腦組織 10% 的勻漿液進(jìn)行 總超氧岐化 酶、谷胱甘肽過氧化物酶、過氧化氫酶活性及丙二醛含量檢測(cè)， 具體方法按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.結(jié)果

2．1 覆盆子各提取部位大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響 ( Morris 水迷宮 法) 在水迷宮實(shí)驗(yàn)中: 與青年組比較，老年組大鼠逃避潛伏期 明顯延長，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少，提示老年組大鼠學(xué)習(xí)記憶 功能降低; 與老年組大鼠比較，乙酸乙酯組、氯仿組、全藥組、銀杏黃酮陽性組大鼠逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增加。而各給藥組中覆盆子乙酸乙酯組對(duì)大鼠逃避潛伏期有更顯著的縮短，且穿越平臺(tái)次數(shù)增加更明顯，結(jié)果見表 1、2。

表 2  覆盆子不同萃取部位對(duì)自然衰老大鼠空間探索的影響 ( x珋± s，n = 10)

結(jié)果見表 3。與青年組相比老年組大鼠腦組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活 性明顯下降，而乙酰膽堿酯酶活性明顯升高。與老年組相比，覆 盆子乙酸乙酯部位、氯仿部位及陽性藥可明顯升高老齡鼠腦組 織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性，同時(shí)降低乙酰膽堿酯酶活性。酶活性、過氧化氫酶活性、丙二醛含量均具有極顯著性差異，提 示自然衰老的老齡鼠腦部可能存在自由基損傷過度，氧化代謝 產(chǎn)生過多，從而引起學(xué)習(xí)記憶功能的下降。與老年組比較，銀杏 黃酮陽性組大鼠的腦組織中谷胱甘肽過氧化物酶酶活性、過氧 化氫酶活性顯著性升高，總超氧岐化酶含量極顯著性升高，丙二 醛含量明顯減少; 覆盆子乙酸乙酯組大鼠腦組織中谷胱甘肽過 氧化物酶酶活性、總超氧岐化酶含量、過氧化氫酶活性均顯著性 升高，丙二醛含量極顯著性降低; 覆盆子氯仿組大鼠的腦組織中 谷胱甘肽過氧化物酶酶活性、總超氧岐化酶活性、過氧化氫酶活 性均顯著性升高，丙二醛含量極顯著性降低; 覆盆子全藥組大鼠 的腦組織中總超氧岐化酶活性、過氧化氫酶活性均顯著性升高， 丙二醛含量極顯著性降低，而谷胱甘肽過氧化物酶酶的活性未 見明顯差異。

年組大鼠的腦組織中谷胱甘肽過氧化物酶酶活性、總超氧岐化

表 4  覆盆子不同萃取部位對(duì)自然衰老大鼠大腦的影響 ( x珋± s，n =10)

112 中藥藥理與臨床 2015; 31( 3)

 學(xué)習(xí)記憶在認(rèn)知活動(dòng)中具有重要作用，同時(shí)也是智力結(jié)構(gòu) 中的重要組成要素。學(xué)習(xí)記憶功能體現(xiàn)出腦的高級(jí)整合功能，其功能的減退、喪失是腦衰老的重要標(biāo)志。Morris 圓形水迷宮 主要用于測(cè)試動(dòng)物( 大、小鼠) 對(duì)空間位置覺和方位覺的學(xué)習(xí)記 憶能力，本實(shí)驗(yàn)通過 Morris 水迷宮結(jié)果顯示與青年組比較，老年 組大鼠逃避潛伏期明顯延長，穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少，提示老 年組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能降低。與老年組大鼠比較給藥組大鼠 尤其是乙酸乙酯組大鼠逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺(tái)面次數(shù) 明顯增加，提示覆盆子各部位有改善老年大鼠學(xué)習(xí)記憶的作 用，且乙酸乙酯部位改善作用最為明顯，其次是氯仿部位，最后 是全藥部位。

乙酰膽堿是中樞膽堿能神經(jīng)的重要遞質(zhì)。它由膽堿乙酰 轉(zhuǎn)移酶( 乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶) 合成、乙酰膽堿酯酶( 乙酰膽堿酯酶) 分解，通過乙酰膽堿受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。乙酰膽堿平衡由乙 酰膽堿轉(zhuǎn)移酶和乙酰膽堿酯酶共同維持。生物體隨著年齡增 長，膽堿能系統(tǒng)功能隨之逐漸衰退，表現(xiàn)為代謝失調(diào)、受體的數(shù) 目和親和力的變化，導(dǎo)致中樞神經(jīng)生理異常。研究發(fā)現(xiàn)增加大 鼠海馬乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶的活性，可提高大鼠空間學(xué)習(xí)的能力 。實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶、乙酰膽堿酯酶 結(jié)果顯 示青年組相比，老年組大鼠腦組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活力明顯下 降，而乙酰膽堿酯酶活性明顯升高，提示老年組大鼠與學(xué)習(xí)記 憶有關(guān)的膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿生成來源減少且水解去路 增加，膽堿能功能下降。與老年組相比，覆盆子乙酸乙酯部位、 氯仿部位及陽性藥可明顯升高老齡鼠腦組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶 活性，同時(shí)降低乙酰膽堿酯酶活性，但是全藥僅升高老齡鼠腦 組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性，對(duì)乙酰膽堿酯酶活性無顯著影響。 同時(shí)覆盆子乙酸乙酯部位比氯仿部位改善作用更明顯，提示覆 盆子乙酸乙酯部位可更顯著的增加與學(xué)習(xí)記憶有關(guān)的膽堿能 神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的含量，提高膽堿能功能而達(dá)改善學(xué)習(xí)記憶 的作用，保護(hù)由衰老導(dǎo)致的機(jī)體腦組織功能降低。

 老年鼠海馬中自由基和興奮性氨基酸相互作用，導(dǎo)致海馬 神經(jīng)死亡.由于海馬是動(dòng)物學(xué)習(xí)、記的重要神經(jīng)解剖學(xué)結(jié)構(gòu)故導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力下降 。自由基又稱游離基 是未配對(duì)電子的原子和原子團(tuán)，它具有高度活潑的化學(xué)特性，會(huì)與相鄰物質(zhì)發(fā)生電子的得失交換，造成組織損傷。像氨基酸這種生物大分子易遭受自由基攻擊。正常情況下，機(jī)體的自由基含量會(huì)很 低，并且會(huì)迅速被酶破壞。但是隨著年齡的增長，酶活性會(huì)降低 以及機(jī)體物質(zhì)代謝會(huì)發(fā)生變化，這必然導(dǎo)致自由基產(chǎn)生過多。 海馬中自由基攻擊興奮性氨基酸，引起海馬神經(jīng)死亡，從而導(dǎo) 致老年鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降。實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)老齡鼠腦組織 谷胱甘肽過氧化物酶活性、總超氧岐化酶活性、過氧化氫酶活 性以及丙二醛含量變化來闡明覆盆子對(duì)老齡鼠學(xué)習(xí)記憶的影 響。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，老年組較青年組，腦組織中與衰老相關(guān) 的酶谷胱甘肽過氧化物酶、總超氧岐化酶、過氧化氫酶的活性 均明顯降低，而與衰老相關(guān)的代謝產(chǎn)物丙二醛含量顯著升高， 表明自然衰老的大鼠作為此次試驗(yàn)的模型是可取的。各給藥 組與老年組比較，腦組織中與衰老相關(guān)的酶谷胱甘肽過氧化物酶、總超氧岐化酶、過氧化氫酶活性在一定程度上升高，而與衰老相關(guān)的代謝產(chǎn)物丙二醛含量也呈下降趨勢(shì)，這表明覆盆子可通過影響老齡鼠腦組織自由基的變化來改善學(xué)習(xí)記憶。且覆盆子乙酸乙酯部位改善最為明顯，氯仿部位其次，最后是全藥部位。

以上結(jié)果提示覆盆子乙酸乙酯部位、氯仿部位以及全藥均有一定的改善自然衰老大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。但是從老年鼠水迷宮的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以及乙酰膽堿酯酶、乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶、老化相關(guān)酶及相關(guān)代謝產(chǎn)物的生化指標(biāo)數(shù)據(jù)上觀察，覆盆子的乙酸乙酯部位改善作用最為明顯，氯仿部位改善作用其次，全藥部位改善作用最弱。然而學(xué)習(xí)記憶的機(jī)制比較復(fù)雜，通路較多，覆盆子其影響學(xué)習(xí)記憶的具體機(jī)制與作用通路仍值得深入研究。

這些有效部位中具體起作用的成分還有待進(jìn)一步探討。