EVOM2是WPI全球專利產(chǎn)品,是最新一代用于特異性完成組織培養(yǎng)研究中TEER測量的電阻儀。它不僅可以定性地測量單層貼壁細胞的健康狀態(tài),而且也能定量地測量單層細胞的融合情況,可用于上皮細胞、胃腸道和呼吸道黏膜細胞、血管上皮細胞及血腦屏障等培養(yǎng)過程中細胞生長狀態(tài)的評價以及藥效動力學評價。
獨特的EVOM2電路設計和STX2電極的完美結合,讓其可以監(jiān)測單層細胞的融合狀態(tài),當與WPI公司設計的EndOhm小室結合使用時,它也可以用來完成更加精確的定量測量或更低電阻的測量,如血腦屏障(BBB)內皮生長電阻測量。
下面,我們就大家常見的幾個問題進行詳細的解答。
1、EVOM2的工作原理是什么?
EVOM2 的工作原理是通過主機產(chǎn)生一個10 μA的恒定跨膜電流,同時以一定的頻率反轉電極的極性,這樣電極和膜都沒有電荷累積,通過STX2 的兩個電流電極(I1和I2)使10 μA 的電流跨過細胞膜,另一對電極(V1和V2)測量要求達到10 μA電流所需要的電壓,并將信息發(fā)送給處理器。處理器根據(jù)歐姆定律將其轉化為歐姆,在讀數(shù)表上顯示數(shù)字。因為電流是固定的10 μA,因此,很容易就轉化出測量結果。如在膜電阻為1000 Ω時,10 μA電流通過的電壓應該是10 mV;在200 Ω膜電阻時,10 μA的電流將產(chǎn)生2 mV的電壓;不論何種情況,在膜或電極上所消耗的能量都非常小。
2、什么是EndOhm小室?它與STX2電極有什么不同?
Endohm作為EVOM2可選電極室,可用來測量低電阻培養(yǎng)細胞或者高精度測量。Endohm與EVOM2一起使用是目前市場上最精確、最經(jīng)濟的一組內皮細胞電阻儀。
小室和蓋子每一個都包含一對同中心電極:在中心有一個電壓敏感性的銀/氯化銀半電極,外加一個環(huán)狀的電流電極,電極上部的高度可以調節(jié)以便適應不同廠家生產(chǎn)的培養(yǎng)杯。對稱的圓形盤狀電極放置于膜的上部和下部,使其比STX2有更加均一的電流密度跨過膜兩側,大大提高了測量的穩(wěn)定性和可重復性。與STX2最大的不同是培養(yǎng)皿必須從培養(yǎng)板轉運至Endohm進行測量,Endohm小室對滲漏組織測量提供了更加方便和經(jīng)濟的解決方案。
3、怎樣進行電極的預處理?
測量電阻時:不需要進行任何預處理,可以直接從干儲存環(huán)境中取出使用。
測量電壓時:電極使用前則需要平衡。為了確保電壓穩(wěn)定性和較低的電極間電勢差,關閉EVOM2電源(O),并且在電極連接到EVOM2時,將電極浸入到點解液中(0.1–0.15M KCl)。當STX2 電壓電極連接到設備且關閉電源時,在內部會形成短路。當電壓電極回路短路幾小時后,電極間的不對稱電勢差就會減小,內部電極直流電勢差只有幾毫伏甚至更少,同時十分穩(wěn)定。在干燥環(huán)境中,平衡電極需要24小時;在溶液中,平衡電極需要2小時。
4、怎么清理我的電極?
(1)清潔STX2電極表面
在使用中,電極表面可能被蛋白質或其他物質覆蓋。這種堆積或污染,會導致系統(tǒng)效率的降低,引起10-20mV電壓誤差,或者讀數(shù)不穩(wěn)(電阻測量不受影響)。如果需要解決這個問題,可以按以下步驟重新氯化電極或者清潔電極表面。
重新氯化:將電極浸入未經(jīng)稀釋的家用漂白水3分鐘,浸泡后用清水立即沖洗,盡管這將重新氯化電極表面,但是不能糾正誤差。(注意事項:確保只有電極尖端置于漂白液中,不能將漂白液接觸電極上部。)
電極表面拋光:用600級砂紙輕輕打磨STX2的電壓電極頂端內側的銀質小球(圖9),輕輕除去銀質小球的表層即可。(注意事項:多次重復打磨最終會除去所有的 Ag/AgCl 小球,如果打磨不再改善電壓讀數(shù)時,則需要更換電極。若沒有600級砂紙,可用橡皮擦代替。)
(2)對STX2電極消毒
STX2 電極是未經(jīng)消毒的?梢杂镁凭h(huán)氧乙烷、紫外線或者殺菌劑消毒,不可以用用高壓滅菌器消毒。(注意事項:電極每次在酒精中的浸泡時間不能超過30分鐘。在酒精里長時間的浸泡,會破壞電極表面的保護層,從而縮短電極使用壽命。)
(3)電極存儲
短期存儲(兩周以內):浸泡電極尖端在電解液中。確保電極線纜插頭連接到EVOM2設備,以便保證系統(tǒng)內部短路并且保證電極對稱性。
長期存儲(兩周以上):長期存儲時,電極要用蒸餾水清洗并且放置在干燥、黑暗處。
(注意事項:當電極暴露在強光或者紫外線中時,電極表面會形成一層黑色氧化膜,通常,氧化膜不會影響電極性能,為了避免氧化膜的行成,應該避光儲存。)
5、EVOM2目前可用于哪些研究領域?
1. 用于研究血腦屏障內皮細胞的藥物和營養(yǎng)物質轉運;
2. 用于CaCo-2大腸癌細胞或其它粘膜或上皮癌細胞的藥效學研究。
3. 用于培養(yǎng)的腸道粘膜細胞的藥物吸收和營養(yǎng)物質轉運研究;
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