1.將采集后的心肺組織粗樣分別置入5ml破碎器研磨管(或普通圓底離心管),每管置入量約占單管1/3體積為最佳;
2.在每個離心管中置入3顆直徑8mm的不銹鋼研磨珠,蓋好管蓋,將離心管對稱裝入適配器中,上搖臂固定;
3.將TL2010S組織破碎器參數(shù)設置為轉速1800rpm、每研磨60秒自動停止研磨10S且循環(huán)5次(即間歇研磨5分鐘);
研磨程序完全停止后,取出并打開離心管,破碎后的樣品狀態(tài)如下圖2現(xiàn)場照片所示,可見樣品破碎得非常均勻細致:
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圖1:TL2010S組織破碎器實機照片 |
圖2:破碎心肺組織的效果現(xiàn)場實拍(使用的是普通5ml離心管) |
為什么實驗室人員之前使用常規(guī)組織勻漿器無法實現(xiàn)較好的破碎處理呢?
鼎昊源科技通過大量樣品破碎測試發(fā)現(xiàn),動物組織類樣品本身相比其他樣品更難破碎,特別是一些結締組織、心臟組織、肺部組織,因為韌性較大,一般很難用普通手工研磨或者常規(guī)組織勻漿器徹底破碎,所以也就無法滿足后續(xù)精細的實驗要求。而使用TL2010S組織破碎器,可針對不同體積和數(shù)量的樣品,搭配不同規(guī)格的離心管及適配器,進行多樣品的同時高速破碎。不僅操作靈活方便,還同時避免了樣品間的交叉污染,省去了清洗儀器的繁瑣工作。
為什么要選用5ml破碎器研磨管(或普通圓底離心管)呢?
我們知道TL2010S組織破碎器還可搭配多個1.5/2.0ml離心管進行研磨,但在本實驗中,這種規(guī)格的離心管相對于要大量破碎的粗樣來說容量偏小,而且可容納的研磨珠也較小,所以撞擊力度有限,達不到最佳的研磨效果。而使用5ml破碎器研磨管(或普通圓底離心管),單管置入的樣品量不僅增加了,還可置入更大尺寸的研磨珠產(chǎn)生更大的撞擊力度,從而獲得更好的研磨效果。
為什么要設置間歇研磨破碎呢?
間歇研磨是TL2010S組織破碎器一個特色功能之一。設置一定的間歇時間,可以有效減少樣品在持續(xù)高速研磨破碎中因快速升溫而發(fā)生降解的情況,為后續(xù)實驗的順利進行提供保障。如果配合液氮低溫處理,可以更有效地降低樣品溫升,利于RNA提取等對溫度敏感的實驗。
最后將快速高效破碎心肺組織的好方法總結成如下公式供大家參考:
快速高效破碎心肺組織的好方法=TL2010S組織破碎器+5ml離心管及適配器+每管3顆直徑8mm研磨鋼珠+5分鐘間歇研磨(每60秒歇10秒,循環(huán)5次)