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磁珠法DNA甲基化方案—高效特異的DNA亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與純化

瀏覽次數(shù):2952 發(fā)布日期:2014-12-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。近年來,大量研究表明DNA甲基化修飾對于維持正常細(xì)胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類腫瘤發(fā)生,起著至關(guān)重要的作用,由此甲基化研究成為表觀遺傳學(xué),乃至生命科學(xué)研究的熱點領(lǐng)域。

那么如何檢測單個基因或者全基因組的甲基化水平或者甲基化位點呢?

當(dāng)前科研領(lǐng)域最常用的檢測方案是使用亞硫酸鹽將DNA中未甲基化的胞嘧啶(C)轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶則保持不變,通過設(shè)計特異性的甲基化引物,進(jìn)行甲基化特異性-PCR或者亞硫酸鹽測序法,從而達(dá)到實驗?zāi)康摹D敲慈绾未_保DNA中未甲基化的胞嘧啶100%完成了轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化過程中防止DNA降解,以及轉(zhuǎn)化后DNA的有效回收成了其中關(guān)鍵!

許多研究人員都會在亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化之前富集甲基化的DNA。一來可降低背景,二來也可節(jié)約成本。目前有兩種基本方法,一個是利用5’-甲基胞嘧啶的抗體來捕獲甲基化DNA,即甲基-DNA免疫沉淀(MeDIP);另一個是利用包含了甲基-CpG結(jié)合結(jié)構(gòu)域(MBD)的蛋白來得到同樣的結(jié)果。

目前市場上的大部分產(chǎn)品都是利用后一種方法。這兩種方法的差別在于MeDIP是在單鏈DNA的背景下特異識別5’-甲基胞嘧啶,而后者更偏愛雙鏈DNA。MBD的另外一個優(yōu)勢是:在利用蛋白酶K將免疫沉淀后的DNA洗脫下來時,MBD2中的甲基化DNA可根據(jù)鹽梯度而逐步釋放。這樣,你就能區(qū)分不同程度的甲基化DNA。

 磁珠法DNA甲基化方案—高效特異的DNA亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與純化

作為表觀遺傳學(xué)的專業(yè)解決方案供應(yīng)商,艾美捷隆重向您推薦Epigentek的BisulFlash DNA Bisulfite Conversion Mag-96 Kit修飾試劑盒。作為最新研發(fā)的磁珠法-DNA亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒,此試劑盒提供了最優(yōu)化的緩沖液配方和試劑,能對DNA樣品進(jìn)行超快速的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)換處理。轉(zhuǎn)化后的DNA經(jīng)過磁珠結(jié)合,洗滌,洗脫,相對于柱純化和瓊脂糖珠beads純化,有效地降低了非特異性吸附帶來的干擾!

本試劑盒作為一款基于96孔板的,適用于高通量研究的DNA亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒,還具有以下優(yōu)點:

  •  快速:96個樣品同時操作,僅需1h20min,平均下來每個樣品只需50s。
  •  便捷:提供液體形式可直接使用的轉(zhuǎn)化液混合物,無需復(fù)雜配置。
  •  高效:在DNA變性的同時,完成C-T的轉(zhuǎn)化。
  •  效率:轉(zhuǎn)化效率達(dá)到了目前市場上其它同類試劑盒無法達(dá)到的99.99%以上,同時錯誤轉(zhuǎn)化率也低至0.1%,實驗結(jié)果更可靠。
  •  靈活:可設(shè)計單次實驗,亦可選擇高通量研究。

*本試劑盒需配套96孔磁力架使用

(EpiMag HT (96-Well) Magnetic SeparatorCat#Q10002-1)

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Figure.2 試劑盒操作流程示意圖               Figure.3 轉(zhuǎn)化后DNA,qPCR驗證的效果圖

Epigentek集團(tuán)公司是全球領(lǐng)先的創(chuàng)新技術(shù)和表觀遺傳學(xué)相關(guān)研究產(chǎn)品的開發(fā)商和供應(yīng)商。公司開發(fā)了包括400多個專利產(chǎn)品的全面的產(chǎn)品組合,為表觀遺傳學(xué)方面的研究和新藥研發(fā)提供全面系統(tǒng)的解決方案。作為Epigentek集團(tuán)中國區(qū)域的總代理,艾美捷將其引入中國,作為其中國區(qū)域代理,將為客戶提供完整的表觀遺傳解決方案,產(chǎn)品包括表觀遺傳研究用分析試劑盒、抗體以及相關(guān)的抑制劑/拮抗劑等產(chǎn)品。同時我們作為多家國際知名品牌的的中國代理或區(qū)域代理,艾美捷能為您提供系列的實驗室解決方案。如果您對上述產(chǎn)品感興趣,請致電免費客戶專線400-6800-868到艾美捷科技有限公司垂詢相關(guān)的產(chǎn)品信息及完整實驗解決方案。http://www.bio-review.com/dna-bisulfite-conversion-mag-kit/

來源:艾美捷科技有限公司
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