細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱(chēng)為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。

基本的步驟包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。

特點(diǎn)： 

1，在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過(guò)程。

2, 非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)（ECM），細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移。

3，與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容，可用于分析細(xì)胞間的相互作用。

4，研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡(jiǎn)單的方法。

傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)步驟：

1，培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫(huà)橫線(xiàn)標(biāo)記（方便拍照時(shí)定位同一 個(gè)視野）。

2，細(xì)胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿(mǎn)板底為宜（數(shù)量少時(shí)可培養(yǎng)一段時(shí)間至鋪滿(mǎn)板底）。

3, 細(xì)胞鋪滿(mǎn)板底后，用1ml槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕，盡量保證各個(gè)劃痕寬度一致。（人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這也是該方法最大的缺陷。）

4，吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。

5，加入無(wú)血清培養(yǎng)基，拍照記錄。

6，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時(shí)取出拍照。

7，根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

德國(guó)IBIDI（易必迪）公司Culture Insert方法

1，準(zhǔn)備細(xì)胞，培養(yǎng)液，culture Insert。

2，如圖，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert，細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500μm寬度的劃痕。

3，每隔4-6小時(shí)拍照記錄。

4，根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)原理示意圖

總結(jié)：相比較于傳統(tǒng)的劃痕實(shí)驗(yàn)，Ibidi的設(shè)計(jì)更科學(xué)、重現(xiàn)性更好。

參考文獻(xiàn)：
A Novel Sialyltransferase Inhibitor Suppresses FAK/Paxillin Signaling and Cancer Angiogenesis and Metastasis Pathways
J. Y. Chen, Y. A. Tang, S. M. Huang, H. F. Juan, L. W. Wu, Y. C. Sun, S. C. Wang, K. W. Wu, G. Balraj and T. T. Chang
Cancer Research, 2011, 10.1158/0008-5472.CAN-10-1303