多肽常用的幾種水解方法

瀏覽次數(shù)：5537　發(fā)布日期：2014-12-3　來源：http://www.ontoresinc.com/

雖然多肽合成的氨基酸組成分析方法較多，且趨向更靈敏、更精確、更簡(jiǎn)便、更快速，但還沒有一種方法可以單獨(dú)適用于所有氨基酸殘基的檢測(cè)，并且很多因素如溫度、時(shí)間、水解試劑、水解方法及多肽合成樣品中添加劑等對(duì)水解程度均有影響。常用的水解方法作簡(jiǎn)要介紹如下:
1酸性水解

酸性水解是應(yīng)用最為廣泛水解方法，可以使大多數(shù)氨基酸殘基完全水解，最通用的水解劑是6 mol/L HCI。

條件:6 mol/L HCI、真空、110℃.水解時(shí)間為20-24h。即可用于液相水解模式也可用于氣相水解模式。但在該條件下，天冬酰胺和谷氨酰胺分別被完全水解為天冬氨酸和谷氨酸，色氨酸則被完全破壞，半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保護(hù)后水解方可測(cè)定，酷氨酸部分被水解液所破壞，絲氨酸和蘇氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸殘基間的肽鍵難于裂解，可以通過延長(zhǎng)水解時(shí)間如水解92h甚至120h來解決。

2堿性水解

堿性水解一般選用NaOH和KOH作為水解劑。該水解方法是HCI水解的互補(bǔ)法。因?yàn)閴A水解時(shí)，多數(shù)氨基酸遭到破壞或外消旋化，僅色氨酸是穩(wěn)定的。所以此法僅限于測(cè)定色氨酸。

3酶水解

用一組蛋白酶水解肽鏈，特別適用于對(duì)化學(xué)水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的測(cè)定。水解過程中氨基酸不發(fā)生消旋化，幾乎可以保持所有的組成氨基酸不被破壞。但是因?yàn)槊杆鈼l件溫和，對(duì)天冬酰胺、谷氨酰胺等皆無破壞作用，且反應(yīng)需要較長(zhǎng)的時(shí)間，水解不完全，酶本身也是蛋白質(zhì)，對(duì)樣品的測(cè)定結(jié)果可能會(huì)有干擾。

微波輻射能水解，一般情況下190℃微波水解15分鐘肽類即可完全水解，導(dǎo)致完全水解的時(shí)間大大縮短。在微波輔助酸水解和微波輔助酶水解中，水解時(shí)間可從過去的幾十小時(shí)縮短到幾十分鐘。

總之，多肽合成藥物水解方式應(yīng)根據(jù)其產(chǎn)品的性質(zhì)、研究目的、可獲得的樣品量及少實(shí)驗(yàn)室的具體條件采取適宜的水解方法。

來源：浙江鴻拓生物技術(shù)有限公司市場(chǎng)
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