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多肽合成的基本原理及相關(guān)問題解答

瀏覽次數(shù):801 發(fā)布日期:2014-11-29  來源:http://www.ontoresinc.com/
1.多肽合成的基本原理?
多肽固相合成法是多肽合成化學(xué)的一個(gè)重大的突破。它的最大特點(diǎn)是不必純化中間產(chǎn)物,合成過程可以連續(xù)進(jìn)行,進(jìn)而為多肽合成的自動(dòng)化奠定了基礎(chǔ)。目前全自動(dòng)多肽的合成,基本都是固相合成。其基本過程如下:
基于Fmoc化學(xué)合成,先將所要合成的目標(biāo)多肽的C-端氨基酸的羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不溶性的高分子樹脂相連,然后以這一氨基酸的氨基作為多肽合成的起點(diǎn),同其它的氨基酸已經(jīng)活化的羧基作用形成肽鍵,不斷重復(fù)這一過程,即可得到多肽。根據(jù)多肽的氨基酸組成不同,多肽后處理方式不同,純化方式也有差異。

2.做免疫用的多肽多長為合適?
答:一般約10-15個(gè)氨基酸,當(dāng)然長一些免疫效果好一些,不過合成費(fèi)用也會(huì)增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上,效果較好。另外,10aa以下的多肽免疫效果比較差。

3.免疫用多肽的純度需要很高嗎?

答:一般而言,免疫用Peptide,70-85%即可。

4.我們合成的多肽溶解性不好,多肽就有問題對嗎?
答:很難準(zhǔn)確預(yù)測一個(gè)多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。如果多肽難以溶解就認(rèn)為多肽合成有問題這個(gè)觀念并不正確。

5.多肽狀態(tài)是如何?如何保存儲(chǔ)存?
答:我們提供的多肽是粉末狀,一般為灰白色,組成不同,多肽粉末的顏色有差異,多肽一般長期保存需要避光保存,并應(yīng)保存在-20度,短期可以保存在4度?梢远虝r(shí)間的話是以室溫運(yùn)輸。

6.如何溶解多肽?
答:溶解多肽是非常復(fù)雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點(diǎn)試驗(yàn),在沒有確定合適的溶劑前千萬不要合部溶解。
下列方法有助于您選擇合適的溶劑:
(1)
判定多肽的電荷特定,設(shè)定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)CCOOH-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)NNH2+1,其它氨基酸的電荷為0。計(jì)算出將電荷數(shù)。
(2)
如果凈電荷數(shù)>0,多肽為堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(3)
如果凈電荷數(shù)<0,多肽為酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(4)
如果凈電荷數(shù)=0,多肽為中性,一般需要用有機(jī)溶劑如乙腈,甲醇或異丙醇,DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。

來源:浙江鴻拓生物技術(shù)有限公司市場
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標(biāo)簽: 多肽合成
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