糖分析是HPLC的典型應(yīng)用之一,它廣泛的應(yīng)用在許多測(cè)試中用以確定膜的性能,一方面可以通過(guò)糖分析來(lái)確定膜去除糖分子的能力,另一方面也可檢測(cè)膜固定化酶的活性。在高級(jí)分析中,目前通常采用薄層色譜法(TLC)、氣體色譜法(GC)以及高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行糖分析。尤其是當(dāng)混合物中包含幾種必須要分離的糖分類型時(shí),更加需要使用這些方法。
本文所描述的HPLC,洗脫液必須具有極高的物理和化學(xué)純度,并且不得含有懸浮機(jī)械性顆;蛉魏卧诒A魰r(shí)間內(nèi)由流穿色譜柱的溶解物質(zhì),因?yàn)檫@些溶解物質(zhì)會(huì)產(chǎn)生干擾信號(hào)。溶劑的質(zhì)量往往對(duì)HPLC分析的可靠性起到?jīng)Q定作用。去離子水或蒸餾水仍然含有微量的可產(chǎn)生鬼峰的有機(jī)物質(zhì)[5]溶劑中的污染物會(huì)在固定相上不斷累積,進(jìn)而導(dǎo)致色譜柱的堵塞,樣品運(yùn)行期間壓力的上升和漂移可以證明這一點(diǎn)。
使用arium® pro VF純化水作為洗脫液
HPLC所需的特殊品質(zhì)的水可以從多家生產(chǎn)商處購(gòu)買,也可以使用一個(gè)水純化系統(tǒng)在現(xiàn)場(chǎng)直接生產(chǎn),比如arium® pro VF系統(tǒng)。下面描述的是分離糖混合物的實(shí)驗(yàn),其中的流動(dòng)相(洗脫)使用的是由arium® pro VF生產(chǎn)的超純水。
查看純水近期優(yōu)惠活動(dòng)
材料和方法:
下載全文查看實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案:下載全文
結(jié)果:
1. 各種糖經(jīng) HPLC色譜柱后的分離結(jié)果。黑色曲線:糖混合物 在確定好每一種糖之后,便開始制備并分離糖混合物(圖5)。
圖5: 單一注射的糖樣品的分離結(jié)果以及糖混合物用超純水經(jīng)交聯(lián)8 % Na+的Rezex RNM
2. 通過(guò)注射磷酸鉀緩沖液和自來(lái)水來(lái)模擬污染物的效應(yīng)或鹽的影響(圖6)
注射的自來(lái)水電導(dǎo)率為265µS/cm,磷酸鉀緩沖液的電導(dǎo)率為1700µS/cm,兩者都顯示了清晰的信號(hào),因而可以明顯地辨別為污染物。在本次分析中使用的arium®超純水的電導(dǎo)率為0.055µS/cm,基本不含干擾性雜質(zhì),表現(xiàn)為波形平坦,沒有波峰產(chǎn)生(見圖6中的綠色基線)。
圖6:2µl的10mM磷酸鉀緩沖液,2µl的自來(lái)水以及2µl的arium® pro VF超純水的色譜圖
分析運(yùn)行過(guò)程中的柱壓恒定地維持在23bar(~ 334psi)。這表明了在色譜柱內(nèi)沒有沉積物累積。開始和結(jié)尾的空白運(yùn)行未顯示出任何改變;亦即,在流動(dòng)相中沒有污染物。
對(duì)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行分析,以確定重現(xiàn)性和檢測(cè)限值。以棉子糖作為這些分析的例子。保留時(shí)間和峰面積均被記錄并在表4中列出。
不斷重復(fù)獲得一致的保留時(shí)間說(shuō)明了具有優(yōu)異的重現(xiàn)性。棉子糖標(biāo)準(zhǔn)系列顯示了一條濃度高達(dá)0.015mg/ml的線性曲線(圖7)。
圖7:棉子糖和arium® pro VF超純水通過(guò)Rezex RNM Carbohydrate Na+ 8%色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)系列(數(shù)值來(lái)自表4)
根據(jù)量化樣本的峰面積生成一條標(biāo)準(zhǔn)的直線,對(duì)棉子糖研究是完全可行的。
結(jié)論:
本文的研究結(jié)果顯示由arium® pro VF生產(chǎn)的超純水可以即時(shí)用作上文所列水溶性糖的HPLC分析的流動(dòng)相,也可用于食品分析,環(huán)境分析,制藥、化學(xué)和生物化學(xué)方面的研究,以及制藥和生物行業(yè)的工藝中質(zhì)量控制測(cè)試。arium® pro VF超純水在HPLC色譜法中作為流動(dòng)相所開展的研究以及所獲得的優(yōu)秀經(jīng)驗(yàn),都使其可在不久的將來(lái)延伸用于其它分離技術(shù),比如反相色譜,尺寸排阻色譜或超高效液相色譜技術(shù)等。
下載全文查看實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案:下載全文