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凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)介紹

瀏覽次數(shù):2475 發(fā)布日期:2014-6-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)可以:
(1)研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用;
(2)可用于DNA定性和定量分析;
(3)用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)

凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù),可用于定性和定量分析。這一技術(shù)最初用于研究DNA結(jié)合蛋白,目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。在檢測RNA結(jié)合蛋白時(shí),依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競爭實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特異), 和其它非相關(guān)的片段(非特異),來確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來確定特異結(jié)合。

來源:上海書俊儀器設(shè)備有限公司
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標(biāo)簽: 凝膠遷移
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