近紅外染料的選用指南
Near-IR CF™ Dyes
熒光強(qiáng)度最高、最穩(wěn)定的長波長染料。特別適合于活體動物體內(nèi)成像
Near-IR CF dye flyer CF dye selection guide什么是近紅外染料？
Biotium-Dyes-20111026.mov
圖 1. Cy7，AlexaFluor750 和 CF750染料穩(wěn)定性測試比較。圖示為染料在陽光照射30分鐘前（黑線）和照射后（灰線）的吸收光譜圖。
近紅外 CF 染料是由 Biotium 公司科研人員開發(fā)的一組吸收和發(fā)射波長在 650 到 800nm 之間的熒光染 料。近紅外 CF 染料是為蛋白標(biāo)記開發(fā)的，熒光強(qiáng)度遠(yuǎn)比其他相似波長的商業(yè)化染料更高， 同時(shí)也更穩(wěn)定。
近紅外染料和傳統(tǒng)的可見光染料相比有顯著的優(yōu)勢。由于細(xì)胞和組織的自發(fā)熒光在近紅外波段最小，因此在檢測復(fù)雜生物系統(tǒng)時(shí)，近紅外染料能提供更高的特異性和靈敏度。同時(shí)，由于光波在近紅外區(qū)段的組織透過性更好，因此近紅外染料尤其適合體內(nèi)熒光成像（活體成像）這一近幾年迅速發(fā)展的新興領(lǐng)域。另外，近紅外染料也是細(xì)胞內(nèi)/全細(xì)胞免疫印記和傳統(tǒng)基于膜介質(zhì)免疫印記的理想染料。
圖 2. 用同型對照或鼠抗人CD3抗體作為一抗，用APC-AlexaFluor750 (Invitrogen) 或CF750標(biāo)記的山羊抗鼠二抗染色Jurkat細(xì)胞�？贵w用量如圖上所列。用BD LSR II 流式細(xì)胞儀的633 nm激光器和780/60 nm PMT檢測器分析熒光。柱狀圖代表了相對熒光值的幾何均數(shù)。
近紅外 CF 染料作為新一代的長波長染料，代表了這一領(lǐng)域的重大突破。現(xiàn)有商業(yè)化的近紅外染料，由于染料的過分聚集以及穩(wěn)定性差，因而受制于熒光亮度有限的問題。得益于 Biotium 公司科研人員采用的創(chuàng)新型分子工程學(xué)技術(shù)，近紅外 CF 染料克服了上述問題，從而比其他競爭產(chǎn)品具備了關(guān)鍵性的優(yōu)勢：近紅外 CF染料熒光強(qiáng)度極高并且非常穩(wěn)定。例如CF750 亮度高至可以在 633nm 處激發(fā)（即在吸收峰值的肩部激發(fā)），而此時(shí)在 770 nm 左右的熒光發(fā)射強(qiáng)度仍然高于基于APC的串聯(lián)染料。因此，近紅外 CF 染料特別適合于流式細(xì)胞儀的各種應(yīng)用，從而可以避免串聯(lián)染料穩(wěn)定性等帶來的問題。
另外，近紅外 CF 染料擁有專利的結(jié)構(gòu)特性，這使近紅外 CF染料和其他競爭產(chǎn)品相比免疫源性更小。因此，在標(biāo)記同一個(gè)蛋白時(shí)，可以連接更多的近紅外 CF 染料以獲得最大的熒光亮度。同時(shí)，這樣標(biāo)記獲得的蛋白復(fù)合物在體內(nèi)的半衰期也更長。
最后一點(diǎn)，由于近紅外 CF 染料優(yōu)異的溶解性和大于 95% 的活化程度，它的標(biāo)記效率也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他近紅外染料。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
產(chǎn)品應(yīng)用：
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圖 3. 柱狀圖代表了圖2中相對熒光值幾何均數(shù)的信噪比。
圖 4.分別用CF750，AlexaFluor750或Cy7標(biāo)記山羊抗鼠IgG二抗。用Hitachi F-4500熒光光度計(jì)測定熒光強(qiáng)度。上圖所示為均一化的熒光值。
圖 6. 用胞內(nèi)CD3抗體或者同型對照孵育Jurkat 細(xì)胞并分別用1ug標(biāo)記了Cy5.5，AlexaFluor680，CF680 或 DyLight680的山羊抗鼠 IgG 熒光二抗染色。用BD FACS Calibur流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測熒光。柱狀圖代表了CD3陽性熒光值和標(biāo)記程度（DOL）相似的同型對照相比的信噪比。
圖 5.分別用CF750，AlexaFluor750或Cy7標(biāo)記山羊抗鼠IgG二抗。染料復(fù)合物的吸收光譜分別對各自的最大吸收值做均一化。Cy7和AlexaFluor750染料有較大的肩峰，顯示了染料的高度聚集，而這種聚集對整體熒光強(qiáng)度是沒有貢獻(xiàn)的。
圖 8. 用胞內(nèi)CD3抗體或者同型對照孵育Jurkat 細(xì)胞并分別用1ug標(biāo)記了CF770，DyLight 800 或 IRDye800CW的山羊抗鼠 IgG 熒光二抗染色。用BD LSR II 流式細(xì)胞儀的633 nm激光器和780/60 nm PMT檢測器分析熒光。柱狀圖代表了相對熒光值的幾何均數(shù)。
圖 7.用鼠抗alpha-tubulin作為一抗，標(biāo)記了CF680的山羊抗鼠IgG作為二抗染色HeLa細(xì)胞。使用以汞電弧燈作為光源的Olympus顯微鏡拍照，使用Cy5 濾鏡組，CCD相機(jī)和 ImagePro Express軟件獲取照片。
圖 9. 細(xì)胞數(shù)量2倍稀釋的HeLa細(xì)胞培養(yǎng)在一塊黑色側(cè)壁，底部透明的96孔板中。將細(xì)胞固定、透膜并用鼠抗alpha-tubulin和兔抗COX IV分別作為一抗，選用CF770或IRDye 800(綠色)標(biāo)記的山羊抗鼠IgG作為二抗，或者選用CF680或IRDye680(紅色)標(biāo)記的山羊抗兔IgG作為二抗染色，抗體的終濃度相同。染色后，細(xì)胞被干燥并用Odyssey®紅外成像系統(tǒng)（Li-Cor）掃描。上面的兩行細(xì)胞是用CF染料抗體復(fù)合物染色的，對應(yīng)的下面兩行細(xì)胞是用商品化購買的IRDye二抗（Li-Cor）染色的。
圖 10. 兩倍稀釋的HeLa 細(xì)胞裂解液先在聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳，然后轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上，并用鼠抗alpha-tubulin和兔抗COX IV分別作為一抗，選用CF770或IRDye 800(綠色)標(biāo)記的山羊抗鼠IgG作為二抗，或者選用CF680或IRDye680(紅色)標(biāo)記的山羊抗兔IgG作為二抗染色，抗體的終濃度相同。染色后，膜被干燥并用Odyssey®紅外成像系統(tǒng)（Li-Cor Biosciences）掃描。對條帶定量后發(fā)現(xiàn)，CF染料的熒光強(qiáng)度大約是相對應(yīng)IRDye 二抗（Li-Cor）的3.5倍。
圖 11. 在尾靜脈注射CF750標(biāo)記的Avastin 24小時(shí)和96小時(shí)后，使用活體成像系統(tǒng)（Caliper LS）分別成像小鼠體內(nèi)的腫瘤。圖片來自于Caliper Life Sciences公司。
| CF Dye | Ex/Em** | 可完全替代以下產(chǎn)品： |
| CF680* | 681/698 | AF680,Cy5.5, DyLight680,IRDye680 |
| CF750 | 755/777 | AF750, Cy7 |
| CF770* |
770/797 | DyLight800, IRDye800 |
* 兼容 LI-COR Odyssey 系統(tǒng)
** Ex/Em 波長基于抗體復(fù)合物
** Ex/Em 波長基于抗體復(fù)合物
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標(biāo)簽：
CF近紅外染料
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