人白細(xì)胞分化抗原40配體酶聯(lián)免疫分析elisa試劑盒說明書
人白細(xì)胞分化抗原40配體酶聯(lián)免疫分析elisa試劑盒說明書
檢測范圍： 48T
30ng/L - 2000ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L）水平。用純化的人CD40L抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CD40L，再與HRP標(biāo)記的CD40L抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CD40L呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L）濃度。
試劑盒組成
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1 |
20倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
7 |
終止液 |
3ml×1瓶 |
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2 |
酶標(biāo)試劑 |
3ml×1瓶 |
8 |
標(biāo)準(zhǔn)品（2000 ng/L） |
0.5ml×1瓶 |
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3 |
酶標(biāo)包被板 |
12孔×4條 |
9 |
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
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4 |
樣品稀釋液 |
3ml×1瓶 |
10 |
說明書 |
1份 |
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5 |
顯色劑A液 |
3ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2張 |
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6 |
顯色劑B液 |
3ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1個 |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
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1000ng/L |
5號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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500ng/L |
4號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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250ng/L |
3號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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125ng/L |
2號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
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62.5ng/L |
1號標(biāo)準(zhǔn)品 |
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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