1　范圍

本方法規(guī)定了化妝品中4-氨基聯(lián)苯及其鹽的液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本方法適用于化妝品中4-氨基聯(lián)苯及其鹽的測定，其檢測限為1.0µg/kg，定量限為3.3µg/kg。

 

2　方法提要

樣品中禁用芳香胺4-氨基聯(lián)苯及其鹽，通過超聲提取，液液萃取及固相萃取小柱凈化并濃縮后，用適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑定容，經(jīng)液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜測定，以內(nèi)標(biāo)法定量。

 

3　試劑與材料

3.1　甲醇：色譜純。

3.2　乙腈：色譜純。

3.3　甲酸：色譜純。

3.4　正己烷：分析純。

3.5　乙醚：分析純。

3.6　氯化鈉飽和溶液。

3.7　HLB固相萃取小柱或相當(dāng)者：500mg/6mL。

3.8　30% 甲醇水溶液：甲醇（3.1）+水=30+70。

3.9　氨水：NH₃含量25% ～28%。

3.10　5% 氨水甲醇溶液：氨水（3.9）+甲醇= 5+95，現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.11　4-氨基聯(lián)苯：CAS 92-67-1，純度＞99%。

3.12　4-氨基聯(lián)苯-D9：CAS 344298-96-0，純度＞99%。

3.13　4-氨基聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1000µg/mL）：準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)10.0mg，用甲醇溶解,稀釋，定容至10mL，于-18℃下保存。

3.14　4-氨基聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別�。�3.13）標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇稀釋定容，制成濃度為1000ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-18℃下保存。臨用時用50%甲醇水溶液稀釋成500ng/mL、250ng/mL、125ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、5ng/mL。

3.15　4-氨基聯(lián)苯-D9 內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：用50%甲醇稀釋內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，得到100 ng/mL 4-氨基聯(lián)苯-D9內(nèi)標(biāo)溶液。

3.16　分別從4-氨基聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.14）中分別吸取0.5mL溶液與0.5mL 100 ng/mL內(nèi)標(biāo)溶液（3.15）混合，制得內(nèi)標(biāo)4-氨基聯(lián)苯-D9濃度為50ng/mL，4-氨基聯(lián)苯分別為250 ng/mL、125 ng/mL、62.5 ng/mL、25 ng/mL、12.5 ng/mL、2.5 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。并根據(jù)需要配制成相應(yīng)濃度的空白基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

 

4　儀器

4.1　液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測器（配ESI離子源）。

4.2　分析天平：感量0.1mg。

4.3　渦旋混合器。

4.4　離心機(jī)：轉(zhuǎn)速10000r/min,容量為10mL。

4.5　樣品過濾器：0.2 μm PTFE濾膜或相當(dāng)者。

 

5　分析步驟

 

5.1 化妝水、面霜、粉底類化妝品

 稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標(biāo)記的4-氨基聯(lián)苯（3.15）,再加入3mL氯化鈉飽和溶液（3.6），于渦旋混合器上使樣品分散，加入3mL乙腈（3.2），充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min 離心10min，吸出上層清液于另一10mL 具塞塑料離心管中，下層氯化鈉飽和溶液用3mL乙腈（3.2）重復(fù)提取步驟一次，合并兩次乙腈提取液，往提取液中加入正己烷（3.4）2 mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，再在乙腈層加入正己烷（3.4）2 mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，轉(zhuǎn)移下層乙腈溶液至另一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮?dú)獯抵两���，并�?0%甲醇水溶液（3.8）重新溶解、定容至2mL，并經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后作為測定液上機(jī)測定。

 

5.2 洗面奶、沐浴液類化妝品

稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標(biāo)記的4-氨基聯(lián)苯（3.15）,再加入3mL氯化鈉飽和溶液（3.6），于渦旋混合器上使樣品分散，加入3mL乙醚（3.5），充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min 離心10min，吸出上層清液于另一10mL 具塞塑料離心管中，下層氯化鈉飽和溶液用3 mL乙醚（3.5）重復(fù)提取步驟一次，合并兩次乙醚提取液，用氮?dú)獯抵两�干，并�?0%甲醇水溶液（3.8）2mL重新溶解，再加入8mL 純水稀釋。

 

HLB 固相萃取小柱（3.7），接上固相萃取裝置，小柱預(yù)先用10mL 甲醇、10mL水進(jìn)行活化、平衡。將待凈化的樣品溶液傾倒入固相萃取小柱，待樣品溶液自然流盡后，依次用10mL純水、5mL 10%甲醇溶液淋洗小柱；待淋洗液自然流盡后，用吸球吹出小柱中的殘留液，用10mL 5%氨水甲醇溶液（3.10）洗脫固相萃取小柱，收集洗脫液，40℃水浴下經(jīng)氮?dú)獯抵两�干，�?0%甲醇水溶液（3.8）重新溶解、定容至2mL，并經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后作為測定液上機(jī)測定。

 

5.3 指甲油與口紅類化妝品

稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞塑料離心管中，加入1mL濃度為100ng/mL氘同位素標(biāo)記的4-氨基聯(lián)苯（3.15）,再加入3mL乙腈（3.2），于渦旋混合器上使樣品分散溶解，充分渦旋，并超聲提取30min，10000r/min 離心10min，取上層清液于另一10mL 具塞塑料離心管中，下層樣品殘渣再用3 mL乙腈（3.2）重復(fù)提取步驟一次，合并兩次乙腈提取液，往提取液中加入正己烷（3.4）2 mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，再在乙腈層加入正己烷2 mL，渦旋離心，靜置分層，棄去上層正己烷溶液，轉(zhuǎn)移下層乙腈溶液至另一10mL玻璃刻度試管中，40℃水浴下用氮?dú)獯抵两���，并�?0%甲醇水溶液重新溶解、定容至2mL，并經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后作為測定液上機(jī)測定。

 

6　測定

6.1　液相色譜參考條件

以下為液相色譜參考條件：

a)   色譜柱：C18，1.7：相，100mmÍ2.1 mm（內(nèi)徑），或相當(dāng)者

b)   柱溫：40℃；

c)   流動相：0.3%甲酸水溶液+乙腈=75+25

d)   洗脫程序：等度；

e)   流速：0.5mL/ min；

f)   進(jìn)樣量：2μL；

 

6.2　質(zhì)譜參考條件

以下為質(zhì)譜參考條件：

a)   電離源模式：電噴霧離子化；

b)   電離源極性：正離子模式；

c)   霧化氣：氮?dú)猓?/DIV>

分析物	保留時間 /min	母離子	子離子	源內(nèi)裂解電壓（V）	碰撞氣能量（V）
4-氨基聯(lián)苯-D9	1.069	179	*159	150	33
4-氨基聯(lián)苯	1.139	170.1	*152	75	30
			93	75	30

相對離子豐度/%	＞50	＞20～50	＞10～20	≤10
允許的相對偏差/%	±20	±25	±30	±50