德國DRG原裝進口，貨號：CLA-4731

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此試劑盒基于化學(xué)發(fā)光免疫原理，用于血清和肝素血漿中CYFRA 21-1的檢測，此試劑盒僅用于研究

此試劑盒采用兩種鼠單抗KS19.1和BM19.21來檢測細胞角蛋白19片段

此試劑盒采用的是化學(xué)發(fā)光免疫法，基于夾心原理

包被板上包被有能結(jié)合CYFRA 21-1分子上獨特抗原位點的單克隆小鼠抗體，含有內(nèi)源性CYFRA 21-1的樣品與HRP標(biāo)記的抗CYFRA 21-1抗體酶聯(lián)物共同孵育，洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物，樣品中CYFRA 21-1的濃度與結(jié)合的酶聯(lián)物的量成正比，加入底物液之后，樣品中的CYFRA 21-1濃度與顏色強度成正比

1.       試劑僅供專業(yè)人士使用

2.       試劑盒中的所有試劑包括檢測過的人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進行處理

3.       開始試驗前，請仔細閱讀說明書，確定所有的事項都已明白

4.       微孔板是可拆的，不用的板條應(yīng)固定在板架上，裝在密封袋內(nèi)保存于2-8℃

5.       加樣時應(yīng)按相同的順序快速加樣

6.       不同的試劑裝在不同的試劑瓶內(nèi)，不能混用，如果用事先裝了酶聯(lián)物的瓶子再裝底物液，則顏色會發(fā)生變化。不要將剩余的試劑倒回原裝瓶內(nèi)，以免污染

7.       充分混勻孔內(nèi)成分，以達到很好的試驗結(jié)果。微孔板不可重復(fù)使用

8.       試驗過程中，不要讓孔內(nèi)出現(xiàn)干燥情況，洗板步驟過后應(yīng)立即加樣

9.       試驗開始前，所有試劑平衡至室溫，溫度會對試驗結(jié)果有影響

10.   不要用嘴吸取樣品，避免皮膚接觸到試劑和樣品

11.   實驗區(qū)內(nèi)禁止飲食或化妝

12.   處理試劑和樣品時應(yīng)戴一次性手套。微生物污染可能會導(dǎo)致結(jié)果失敗

13.   按照相應(yīng)的國家生物安全管理條理進行操作

14.   不要使用過期的試劑

15.   所有試劑的量都應(yīng)按說明來，使用校正的移液器和發(fā)光儀可得到最佳的結(jié)果

16.   發(fā)光底物液對光敏感，應(yīng)避免陽光直射，保存于黑暗處

17.   不要混合使用不同批次的試劑，板條。試劑盒的運輸和貯存環(huán)境不同可能會導(dǎo)致結(jié)果有微小的區(qū)別

18.   有些試劑內(nèi)含有Proclin300，BND和MIT作為防腐劑，萬一眼睛或皮膚接觸到了應(yīng)立即用水沖洗

19.   按照相應(yīng)的國家生物安全管理條理公認的方法處理樣品和試劑

20.   有害物質(zhì)的相關(guān)信息請參考MSDS，產(chǎn)品的MSDS可直接向DRG索取

1.       微孔板，12x8, 96孔，可拆，包被有抗CYFRA 21-1抗體（單克�。�

2.       標(biāo)準(zhǔn)品，0-4,5支，凍干粉，1.0ml，濃度為：0；3；10；25；50ng/ml   含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

3.       質(zhì)控，1支，1.0ml，質(zhì)控值和范圍請見QC質(zhì)控單  含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

4.       樣品稀釋液，1支，3ml，即用，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

5.       酶聯(lián)物，21X，1支，0.5ml，HRP標(biāo)記的抗CYFRA 21-1抗體，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

6.       酶聯(lián)物稀釋液，1支，7ml，即用，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

7.       底物液

試劑A，1支，2.0ml，注意：光敏感

試劑B，1支，2.0ml，注意：光敏感

試劑C，1支，5.0ml

8.       洗滌液，1支，30ml，40X

1.       發(fā)光光度計

2.       校正的移液器

3.       吸水紙

4.       去離子水或雙蒸水

5.       計時器

6.       半對數(shù)坐標(biāo)紙或數(shù)據(jù)處理軟件

未開封的試劑在2-8℃下可保存至有效期，不要使用過期的試劑

打開的試劑必要保存在2-8℃，微孔板也保存于2-8℃，一旦打開了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封

注意：配制標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品在2-8℃下可保存至少4周，在-20℃下可保存更長時間

實驗前將所有試劑平衡至室溫

標(biāo)準(zhǔn)品

向標(biāo)準(zhǔn)品瓶內(nèi)加1ml去離子水配制

2-8℃下可保存至少4周，在-20℃下可保存更長時間

質(zhì)控品

向質(zhì)控品瓶內(nèi)加1ml去離子水，放置10min，使用前反復(fù)混勻

2-8℃下可保存至少4周，在-20℃下可保存更長時間

洗滌液

加去離子水稀釋40X的濃縮洗滌液

30ml的濃縮洗滌液+1170ml的去離子水，即得1200ml的工作洗滌液

室溫下可保存2周

酶聯(lián)物

用酶聯(lián)稀釋液以1:21的比例稀釋

配制的酶聯(lián)物24小時內(nèi)使用

例如：如果板條全部使用，吸取300ul的濃縮酶聯(lián)物，加上6ml的酶聯(lián)物稀釋液，即得

如果板條不全使用，吸取25ul的濃縮酶聯(lián)物，加上0.5ml的酶聯(lián)物稀釋液，即得

相關(guān)酶聯(lián)物制備見下表

板條數(shù)	酶聯(lián)濃縮物 （ul）	酶聯(lián)稀釋液 （ml）
1	25	0.5
2	50	1.0
3	75	1.5
4	100	2.0
5	125	2.5
6	150	3.0
7	175	3.5
8	200	4.0
9	225	4.5
10	250	5.0
11	275	5.5
12	300	6.0

化學(xué)發(fā)光底物液

試劑A和試劑B混合，然后以1:2的稀釋比例用試劑C稀釋，即得即用的底物液

現(xiàn)配現(xiàn)用，只能保存1小時

如果所有板條都使用，則試劑A和試劑B各1.5ml混合+3ml的試劑C

試驗可采用血清和肝素血漿

檸檬酸鹽血漿值減小，EDTA血漿值增高

不要使用溶血，黃疸或脂血的樣品

注意：不要使用含有疊氮化物的樣品

血清

靜脈穿刺采血，允許凝集，室溫下離心分離出血清。未完全凝固時不可進行離心。接受了抗凝劑治療的捐獻者的血液凝集時間更長

血漿

將全血收集到含有抗凝劑的離心管內(nèi)，采集后立即離心

樣品貯存和準(zhǔn)備

實驗前，將樣品蓋上蓋子，貯存于2-8℃，可保存2天，想保存更長時間則需凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融

在最初的試驗中，如果樣品濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度，則應(yīng)用樣品稀釋液進行稀釋

結(jié)果計算時應(yīng)乘以稀釋因子

例如：

A）1:10稀釋   10ul血清+90ul樣品稀釋液（充分混勻）

B）1:100稀釋  10ul稀釋液A）1:10+90ul樣品稀釋液（充分混勻）

1.       實驗前將所有試劑平衡至室溫，混勻，不產(chǎn)生氣泡

2.       實驗一旦開始，所有步驟必須完整的進行下去

3.       避免污染試劑，槍頭和微孔/管。每個微孔的加樣都應(yīng)該用新的槍頭，避免交叉污染

4.       實驗前將所有試劑準(zhǔn)備好，蓋子打開，所需板條固定等，這樣可以確保每個步驟間隔時間一致，無中斷。

5.       酶免反應(yīng)中時間和溫度成線性關(guān)系

每次檢測都應(yīng)建立一標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.       將實驗所需板條固定于板架上

2.       加50ul的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)

3.       每孔加50ul現(xiàn)配的酶聯(lián)物，充分混勻10秒，充分混勻這一步很重要

4.       室溫下孵育30min（無需蓋板）

5.       棄去孔內(nèi)廢液，每孔300ul的洗滌液洗板3次，吸水紙上拍干

重要提醒：洗板過程直接會影響到實驗的靈敏度和精確度

6.       每孔加50ul現(xiàn)配的底物液

7.       室溫下孵育10min

8.       加入底物液20min內(nèi)在發(fā)光光度計上讀數(shù)

1.       計算各標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品的RLU平均值

2.       在半對數(shù)坐標(biāo)紙上，以標(biāo)準(zhǔn)品的RLU的均值為Y軸，濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.       從標(biāo)準(zhǔn)曲線上通過RLU均值找到相對應(yīng)的濃度值

4.       全自動法：自動法用最合適的4參數(shù)對數(shù)擬合法計算，它是首選計算方法，其他方法得出的結(jié)果可能會有細微的區(qū)別

5.       樣品濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，樣品濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品濃度的則需進一步稀釋，或記錄為＞50ng/ml。結(jié)果計算時要乘以稀釋因子

試驗中嚴(yán)格按照說明書操作和良好的實驗操作習(xí)慣可得到最優(yōu)試驗結(jié)果

任何不恰當(dāng)?shù)奶幚砘蛟囼灢襟E的改動都會對結(jié)果造成影響

以下物質(zhì)低于下面所述濃度，其實驗結(jié)果都會不明顯

 

 

 

 

試驗中含有減低HAMA和嗜異性抗體干擾作用的試劑，然而，高滴定量的HAMA和嗜異性抗體可能會對試驗結(jié)果產(chǎn)生干擾

藥物干擾

目前為止還沒有一種藥物對CYFRA 21-1檢測會產(chǎn)生影響

 

 

 

 

 

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