試劑和器材:
1. 抗凝血?jiǎng)?00mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉;
2. Hepes緩沖生理鹽水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;
3. 淋巴細(xì)胞分離液(例如LymphoprepTM或NycoPrepTM1.077)或OptiPrepTM,用Hepes緩沖生理鹽水稀釋(分別加入5倍體積和17倍體積);
4. 臺(tái)式低速離心機(jī);
5. 巴斯德吸管(短型和長(zhǎng)型);
6. 5—10ml規(guī)格注射器和金屬套管針;
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 用乙二胺四乙酸(2mmol/L終濃度)或檸檬酸鈉(38g/L終濃度)作為抗凝劑來(lái)收集靜脈血;
2. 用等體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋血液,反復(fù)多次輕輕顛倒;
3. 用塑料巴斯德吸管,取6ml稀釋過(guò)的血液加入到離心管中3ml的選定介質(zhì)之上;
4. 20℃,以700g離心15min(LymphoprepTM)或700g離心20min(NycoPrepTM1.077或碘克沙醇溶液);
5. 用緩慢減速程序或不制動(dòng)的方法使轉(zhuǎn)子減速;
6. 用巴斯德吸管在界面上收集細(xì)胞;
7. 用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋并且以200g—500g離心15min收集細(xì)胞;