體外三維基質(zhì)中原代CD34+細(xì)胞的擴增

                     
試劑和材料：
1. 培養(yǎng)基：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的IMDM，添加1%牛血清白蛋白，10μg/ml胰島素，0.1mmol/L 2-巰基乙醇，50U/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素；
2. 48孔培養(yǎng)板；
3. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
4. 纖維粘連蛋白（fibronectin）包被的細(xì)胞基質(zhì)支架；
5. 細(xì)胞因子（干細(xì)胞因子，IL-6，IL-3，F(xiàn)lt-3配體）；

實驗方法：
1. 用含細(xì)胞因子的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞（100ng/ml干細(xì)胞因子，20ng/ml IL-6，20ng/ml IL-3和100ng/ml Flt-3配體）；
2. 將2.5×105 CD34+細(xì)胞/ml接種到纖維粘連蛋白包被的48孔培養(yǎng)板；
3. 每周兩次半量更換新鮮培養(yǎng)基；
4. 兩周后收集細(xì)胞；
 （1）250g離心10min，從三維細(xì)胞基質(zhì)支架中收集非貼壁的細(xì)胞；
 （2）貼壁的細(xì)胞用0.05%胰蛋白酶/EDTA孵育細(xì)胞基質(zhì)，37℃孵育30min，隨后250g離心10min；