從臍靜脈分離干細胞

試劑和材料：
1. 培養(yǎng)基：完全LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%熱滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；
2. PBSA；
3. 胰蛋白酶，0.05%，含EDTA；
4. 膠原酶A，0.1%用PBSA配制；
5. 培養(yǎng)瓶；
6. 導管；

實驗方法：
1. 在正常分娩后6-12h內收集和處理臍帶；
2. 在臍靜脈內插入導管，用PBSA完全地洗2次；
3. 夾住遠端臍帶；
4. 用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈；
5. 夾住近端臍帶；
6. 將臍帶在37℃孵育20min；
7. 輕輕按摩臍帶，收集含有內皮和內皮下層細胞的懸浮液，600g離心10min；
8. 用培養(yǎng)基重懸細胞；
9. 計數(shù)后，按1×103個細胞/cm2的密度將細胞接種到75cm2的培養(yǎng)瓶中；
10. 3天后更換培養(yǎng)基，除去未貼壁細胞，保留貼壁的細胞繼續(xù)生長，每3天更換一次新鮮培養(yǎng)基，至大約2周后可見成纖維樣細胞生長；
11. 在這種情況下，用0.25%胰蛋白酶/EDTA收集細胞，傳代到新培養(yǎng)瓶中繼續(xù)擴增；