在現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)研究中，常常需要將全血中單核白細(xì)胞（淋巴細(xì)胞、大單核細(xì)胞）與紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞分離。在臨床治療應(yīng)用中常常需要將全血作成分分離（全血分離成血漿，血小板，白細(xì)胞，紅細(xì)胞等等）

（一）血細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室純化：
血液中存在著各種不同類型的血細(xì)胞，每種類型細(xì)胞有不同的特點(diǎn)和功能。醫(yī)學(xué)研究常常需要較純的單一品種的血細(xì)胞。用離心法分離和純化是非常有效的手段，但如何使血細(xì)胞的密度梯度分離簡(jiǎn)單而且實(shí)用，很多科學(xué)家和試劑生產(chǎn)廠作了大量的研究和篩選。在這方面Bφyum（文獻(xiàn)1）做了開拓性的研究，他使用挪威Nycomed pharma，A/S公司生產(chǎn)的梯度材料Lymphoprep 和由瑞典Pharmacia-Biosystems AB 公司提供的Ficoll Paque，用簡(jiǎn)單的低速階梯梯度離心純化了單核白細(xì)胞獲得成功。此后（文獻(xiàn)2），用非電離性梯度材料Na-metrigoate 和Nycodenz（可消除多糖成分）純化血細(xì)胞效果更好。

典型的離心分離實(shí)驗(yàn)：
1. 人血單核細(xì)胞的純化：
Ⅰ 加有抗凝劑的全血樣品，通常加0.32％檸檬酸鈉較為普遍；
Ⅱ 用等量的等滲鹽液稀釋全血
Ⅲ 在10－15ml離心管下部注入3ml Na-metrizoate-Ficoll分離液
Ⅳ 在分離液上部小心地鋪蓋6ml已經(jīng)稀釋的全血
Ⅴ 低速離心機(jī)，水平轉(zhuǎn)頭，單管容量10－15ml，600xg，20分鐘，20℃，慢加速，慢減速。（不要用4－5℃，否則效果很差）
Ⅵ 離心后，單核細(xì)胞和少量血小板懸浮在血液樣品和分離液的中向夾層，小心地用吸管吸出
Ⅶ 在單核細(xì)胞中加幾毫升生理鹽水以降低其密度
Ⅷ 用同樣的離心機(jī)250xg，5分鐘，20℃“洗”數(shù)次，可以得到更純的單核細(xì)胞沉淀
Ⅸ 制備的細(xì)胞可重懸浮在生理鹽水或同源血漿中待用

2. 單核血細(xì)胞和多形核血細(xì)胞的單次離心分離法：
Ⅰ 剛抽出的新鮮人血，加抗凝劑后，取3-5ml鋪在10ml離心管底部
Ⅱ 血樣上部鋪等量的Polymorphoprep（Nycomed Pharma A/S公司產(chǎn)品）
（注意：選擇較細(xì)長(zhǎng)透明塑料（PC或PET）離心管或玻璃離心管，液柱總高在6－10mm左右）
Ⅲ 離心：低速或高速冷凍離心機(jī)水平轉(zhuǎn)頭450g×35分鐘，20℃
Ⅳ 離心后細(xì)胞分布：以10cm液柱為例，底部1.2－1.4cm為紅細(xì)胞，往上3cm為分離液，再往上0.4cm為中性白細(xì)胞帶（多形核白細(xì)胞），再往上0.6－0.8cm為分離液，在這層分離液和最上層血漿之間夾有一層約0.4cm液柱高的單核細(xì)胞
Ⅴ 如果離心時(shí)間過長(zhǎng)，或溫度過高，多形核白細(xì)胞（主要是中性白細(xì)胞）也會(huì)變成沉淀

常用的商品化的分離介質(zhì)：

（二）人全血的成分分離：
在血站或血液中心用大容量冷凍離心機(jī)和多聯(lián)血袋進(jìn)行大量的血液成分分離
以下介紹在我國(guó)有500臺(tái)以上主機(jī)，分布在300多個(gè)血站的日立CR-7大容量離心機(jī)作血液成分分離的二種主要方法（富含法和白膜法）的離心工藝，僅供參考。

參考文獻(xiàn)：
1. Bφyum,A. Scand,J.Clin Invest,vol:21(suppl:97)PP.77
2. Bφyum,A.Berg,T. Blomhaff,R. “Iodinated density gradient media: a practical approach” IRL Press.Oxford 1984
3. Adriaan Brouwer等 “Centrifugal separations of mammalian cells” in “Prepararive Centrifugation” IRL press.Oxford Univ.1992
4. 余興明“細(xì)胞的離心分離基礎(chǔ)和分離實(shí)例”，天美科技“實(shí)驗(yàn)離心技術(shù)講座：第19篇“2006. www.techcomp.cn

作者：余興明   電話：13764301893,[email protected]