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如何結(jié)合液氮使用Bullet Blender破碎組織細胞

瀏覽次數(shù):5290 發(fā)布日期:2010-6-25  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
      對于一些特別堅硬或韌性比較強的樣品,如:硬骨骼、軟骨、指甲、魚鱗、結(jié)締組織、種子等,使用普通機械研磨方法很難即保證研磨破碎效果又保證樣品一直處于低溫狀態(tài)。傳統(tǒng)手工研磨方法雖然能二者兼顧,但是當樣品數(shù)量比較多時,手動研磨非常費時費力,而且經(jīng)常存在交叉污染的可能。如果提取RNA、酶等對溫度比較敏感的物質(zhì),使用液氮進行預處理,保證樣品在破碎過程中一直處于低溫是非常重要的。

        使用Bullet Blender進行組織細胞的破碎時,將樣品用液氮進行預冷凍,這樣既能保證樣品的破碎效率又能保證樣品一直處于低溫狀態(tài)。以骨骼和植物葉片為例,具體操作方法如下:

        骨骼:

        取0.3克骨骼,用濾紙吸取骨骼表面水分,放入樣品管,加入1.6mm不銹鋼研磨珠5粒,再加3勺0.5mm不銹鋼研磨珠,蓋上管蓋。將整個試管放入液氮中冷凍10到20秒鐘,然后放入機器處理20秒鐘。取出樣品管可見樣品被破碎成乳白色粉末,然后加入提取緩沖液,再處理1分鐘或直接進行后續(xù)提取,加入緩沖液之前能保證樣品溫度一直為-20℃以下。

        葉片:

        取0.2克植物葉片,清潔葉片表面后放入樣品管,加入2.0mm氧化鋯研磨珠5粒,再加3勺1.0mm氧化鋯研磨珠,蓋上管蓋。將整個試管放入液氮中冷凍10到20秒鐘,然后放入機器處理20秒鐘。取出樣品管可見葉片被破碎成綠色粉末,然后加入提取緩沖液,再處理1分鐘或直接進行后續(xù)提取,加入緩沖液之前能保證樣品溫度一直為-20℃以下。

注意:樣品管必需使用Eppendorf 1.5mL Safe-Lock微量離心管(訂貨號:0030 120.086)。

產(chǎn)品詳細介紹見:http://www.bio-xplorer.com/_d269808107.htm

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