發(fā)酵罐操作規(guī)程
瀏覽次數(shù):10803 發(fā)布日期:2008-5-17
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操作前請認真檢查冷水機、空壓機、反應(yīng)器、進出水管、氣管情況。填好使用說明書。
開機:先打開其他單元上的開關(guān),再打開主機背后的開關(guān)。
關(guān)機:先把控制器上所有單元的參數(shù)狀態(tài)調(diào)到off,把進氣開關(guān)打開后關(guān)機;關(guān)機時先
關(guān)控制器后面的開關(guān),再關(guān)其他單元上的開關(guān)。
滅菌操作
1、取下馬達,平放于桌上。罐頂端套上黑色保護帽。
2、由罐上取下溫度傳感器,該傳感器不需要滅菌。
3、取下PH電纜線,蓋上紅色保護帽;將PH電極要插到底。務(wù)必擰緊電極的上下兩個固定螺帽。PH電極滅菌前要標(biāo)定。PH電極標(biāo)定:接好電纜后擰開電極的固定螺帽(第一個),將PH電極取出后用去離子水沖洗干凈后,輕輕用面紙吸干上面的水后先放入標(biāo)準(zhǔn)溶液4.01中校正,等控制器上數(shù)據(jù)穩(wěn)定后在 set zero處輸入4.01(不管實際數(shù)值的微弱差別);輸入完閉后從標(biāo)準(zhǔn)液中取出電極,沖洗、吸干后放入7.00的標(biāo)準(zhǔn)溶液中,等控制器上數(shù)據(jù)穩(wěn)定后在set span處輸入7.00(不管實際數(shù)值的微弱差別)。PH電極校正后不要關(guān)控制器。
4、取下DO電纜線,DO電纜接口處用錫箔紙包好后套上黑色帽。DO電極滅菌完后標(biāo)定。DO電極要插到底,擰緊電極的上下兩個固定螺帽。滅菌前要注意溶氧電極里頭的保護液是否還有,沒有則要進行添加。
5、取下消泡或液位電纜線,將消泡或液位電纜插到底,滅菌后定位到所需要的高度后就不要再壓下去。消泡電極的高度離液面約1.5cm處。
6、拆下發(fā)酵罐上和冷凝器上的進、出水管,拆下的同時要用夾子夾住拆下水管的接頭處,以防水流出。
7、發(fā)酵罐上的過濾器的兩端多要用夾子夾死,過濾器的出口處用錫箔包好,所有過濾器的兩端多要用夾子夾住。發(fā)酵完畢倒罐后注意檢查過濾器是否被打濕,若有則趕快用吸球?qū)⑵渲械囊后w吹出。
8 、用鐵夾夾死收獲管上的硅膠管以防在滅菌鍋內(nèi)跑液。收獲管不用時上面一定要卡死不移走。
9、在滅菌前.將發(fā)酵罐的六個固定螺帽擰松出氣,其他螺帽一定要擰緊!滅菌完后打開高壓鍋后立刻將其擰緊,注意戴上手套防止被燙傷。
10、酸不要放高壓鍋內(nèi)滅菌,將空的酸液瓶上的過濾器用錫箔包好,并將瓶蓋擰松出汽。滅菌完后去掉錫箔過濾器上的錫箔紙作為出汽口。(注意與酸瓶相連的硅膠管不要卡死);堿液瓶和硅膠管可以一起滅菌(與堿液瓶相連的硅膠管要卡死)。
11、取下電熱夾套將其平鋪于桌面。
12、滅菌前調(diào)整好攪拌葉的位置,底下的攪拌葉盡量靠近空氣分布器,上面的一個位置調(diào)整到所加發(fā)酵液的中間位置。
13、取樣器的位置不要靠近擋板的位置,盡量靠中間位置。
14、滅菌前將取樣器的吸球取下。所有的硅膠管不要靠到高壓鍋的內(nèi)壁上。
滅菌完畢后
1、將六個松開的固定螺帽和酸堿瓶蓋擰緊。
2、去掉包在過濾器上的錫箔紙和卡硅膠管的夾子。
3、裝上馬達,若馬達內(nèi)側(cè)潤滑油干了,涂上適量的凡士林。
4、接上溶氧電纜線后進行DO電極標(biāo)定:滅菌完后接上DO電極的電纜線后在set zero
處輸入0;將反應(yīng)器的空氣流量控制在1L/min,Agitation調(diào)到100r/min過夜,早上開在set span處輸入100后按確認鍵。
5、等溫度降到發(fā)酵所需溫度時接好各進出水管、PH電纜線,消泡電纜線。
6、在放入溫度電極之前,先往溫度電極的進口里滴加甘油,插入電極后繼續(xù)滴加到冒出止。注意溫度電極要插到底。
7、.檢查空壓機的輸出壓力,應(yīng)在0.7~1.0kg/cm3 范圍內(nèi)。
8、消泡劑的硅膠管要按從下往上順序在泵上安裝。
冷水機工作溫度的設(shè)定
開機:接好進出水管→打開總電源→進行溫度設(shè)計→打開循環(huán)泵→開始制冷
關(guān)機:先關(guān)制冷開關(guān)→關(guān)循環(huán)泵開關(guān)→同時將進、出水口閥門關(guān)閉→關(guān)上電源
溫度設(shè)定:開機→面板顯示“PP0.0” →按“移位鍵”和“調(diào)整鍵”后顯示“PP0.1”
→按SET鍵確認→此時面板顯示上限值,按“移位鍵”和“調(diào)整鍵”設(shè)定上限值→按SET鍵確認→此時面板顯示下限值,按“移位鍵”和“調(diào)整鍵”設(shè)定下限值→按SET鍵確認→再按SET鍵→再按SET鍵→面板顯示結(jié)束標(biāo)志“---”,按SET鍵回到測量顯示,設(shè)置結(jié)束。
上述操作結(jié)束后準(zhǔn)備接種
接種準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好鐵擋板、打火機、酒精噴壺、接種圈、裝95%乙醇的搪瓷缸容器、尖頭鉗子、活動扳手,接種瓶。
接種操作
1、移開接種口附近的膠管,將鐵擋板圍住接種口后用酒精噴壺朝接種口處噴酒精后點著,(注意:如果有火焰順著酒精溢出鐵板外,則需要吹滅鐵板兩側(cè)溢出的火焰。)
2、將接種圈沾酒精點著后套住接種口處,將扳手或鉗子沾酒精后擰開螺帽后用鉗子將其夾住拿出,吹滅螺帽和鉗子上的火焰后迅速放入裝95%乙醇的搪瓷缸容器里。
3、將接種瓶在火焰處拔開后迅速倒入發(fā)酵罐內(nèi)。完畢后用鉗子夾出螺帽擰上。整個過程確保無菌操作!
溶氧設(shè)定:發(fā)酵模式下溶氧的控制由有四種情況:按off鍵→按control鍵→ 按Auto鍵→setup→cascade→選擇以下四種模式。
1、None狀態(tài):溶氧的控制主要通過增加空氣流量和設(shè)定好固定的轉(zhuǎn)速來控制。
2、Agit狀態(tài):溶氧的控制主要通過提高轉(zhuǎn)速來控制,此狀態(tài)在空氣流量保持不變的情況下溶氧隨著細胞消耗降低時通過增加轉(zhuǎn)速來提高溶氧水平。直到轉(zhuǎn)速達到設(shè)訂的轉(zhuǎn)速上限值為止。該過程為自動控制。
3、02 狀態(tài):該狀態(tài)主要通過控制氧氣與空氣的混合百分比來控制。溶氧隨著氧氣百分比的增加而增加。為自動控制過程。
4、Agit/ 02 狀態(tài):該狀態(tài)中溶氧的控制先是通過提高轉(zhuǎn)速來增加的,當(dāng)轉(zhuǎn)速達到設(shè)定的上限值時若實際溶氧值仍沒達到所需要的設(shè)定值,此時轉(zhuǎn)速控制在上限值,開始以從小到大的百分比自動提高氧氣的進入量,直到達到所設(shè)定的溶氧值附近為止。該過程亦為自動控制過程。
注意:在使用Agit狀態(tài)和Agit/ 02 狀態(tài)時,若實際溶氧值與設(shè)定值相差太大,則要確保所設(shè)定的攪拌轉(zhuǎn)速上限值不要太大,否則轉(zhuǎn)速會瞬間內(nèi)增大帶來太大的剪切力和大量的泡沫。實際操作中可以同時通過空氣流量計的手動控制來輔助操作。
按off鍵→按control鍵→ 按Auto鍵→setup→此時界面中出現(xiàn)的P Gain和 l Gain為兩個出廠設(shè)定好的參數(shù),不要改動。
其他控制操作:
選擇U1:1、開機后→按use鍵→按U1~U4單元的Fermentation 或cell culture鍵選擇發(fā)酵模式或細胞培養(yǎng)模式;連續(xù)按翻閱鍵→分別對U1~U4單個單元進行控制操作。
2、Tem→按off鍵→按control鍵→ 按Auto鍵→ 按setpoint鍵,輸入設(shè)定值→按確定鍵→按 Disp Hi輸入上限值后按確定鍵→ 按 DispLo輸入下限值后按確定鍵;輸入值若有錯誤按刪除鍵后更改。
攪拌設(shè)定:按off鍵→按control鍵→ 按Auto鍵→ 按setpoint鍵→輸入設(shè)定轉(zhuǎn)速值→按確定鍵→Disp Hi和DispLo值的設(shè)定如上。
Pump A: 1、off→按control鍵→按manual→按 setpoint 設(shè)定百分比(以10秒為單位,如鍵入20%表示轉(zhuǎn)2秒停8秒:100%表示連續(xù)運轉(zhuǎn))→Disp Hi和 DispLo的設(shè)定同上。PumpB和PumpC的設(shè)定與PumpA相同。
2、off→按control鍵→按Antiforma(消泡)鍵 →wet on和wet off 分別調(diào)節(jié)液位的高低。
3、PumpC暫時沒有連接蠕動泵;蠕動泵3與堿相連,蠕動泵4與酸相連。
PH值設(shè)定:1.off→按control鍵→ 按Auto鍵→ 按setpoint鍵→輸入設(shè)定值后按確定鍵→Disp Hi和Disp Lo值的設(shè)定如上。
dO2值設(shè)定:按off鍵→按control鍵→ 按Auto鍵→ 按setpoint鍵→輸入設(shè)定值后按確定鍵。
O2流量設(shè)定:按control鍵→ 按Auto鍵→按setpoint鍵輸入設(shè)定的百分比。
Unit2、Unit3、Unit4的操作同上。