本試劑盒僅供研究使用。

                                                                   96T

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,血漿樣本中乙型肝炎E抗原（HBeAg）表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人乙型肝炎E抗原（HBeAg）表達。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中乙型肝炎E抗原（HBeAg）相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人乙型肝炎E抗原（HBeAg）的存在與否。

試劑盒組成

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。待測樣品孔中加待測樣本50μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，

3. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

5. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

   計算和結果判定：

     試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

     臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

     陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為乙型肝炎E抗原（HBeAg）陰性

     陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為乙型肝炎E抗原（HBeAg）陽性。

   注意事項

   1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

   2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

   3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

10. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    5．底物請避光保存。

    6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

    7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：；2-8℃。

    2．有效期：6個月