本試劑盒僅供研究使用。
                                                                     96T
 
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中C-反應(yīng)蛋白(CRP)表達。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)表達。用純化的小鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中C-反應(yīng)蛋白(CRP)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的C-反應(yīng)蛋白(CRP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中小鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)的存在與否。
試劑盒組成

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	陽性對照	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	陰性對照	0.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟

• 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

 
 

• 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 
計算和結(jié)果判定：
  試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
  臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
  陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為小鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)陰性
  陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為小鼠C-反應(yīng)蛋白(CRP)陽性。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
 

       上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，科研機構(gòu)、高校、院所及企業(yè)產(chǎn)品開發(fā)研究提供所需要的科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)等。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細胞學(xué)，通過公司各個部門所有員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶的厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽”的精神，堅持以先進的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽，為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時，也建立了一套集技術(shù)支持、物流、售后服務(wù)等多個部門聯(lián)動服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個客戶本研究所鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到，公司總投資超過2000萬元，并先后引進了自動化設(shè)備，組建了專業(yè)的研發(fā)技術(shù)團隊。憑借著潔凈化的生產(chǎn)車間、標準化的質(zhì)量管理系統(tǒng)，為生產(chǎn)高質(zhì)量的產(chǎn)品提供了有效保證。
     雅吉生物自主研發(fā)的ELISA試劑盒，在國內(nèi)眾多重點實驗室廣泛使用，深受廣大科研人員的好評，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。 
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