產品名稱：2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋
產品用途：用于厭氧培養(yǎng)，可放置10-12個平皿
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培養(yǎng)基的保質期各不相同。不同的標準中均有明確規(guī)定了保存的條件和保質期。培養(yǎng)基應保存在防止其成分發(fā)生變化的環(huán)境下，即應避光、干燥保存；如有必要，用保存于2℃～8℃冰箱中，或依據培養(yǎng)基要求的儲存條件進行保存。除標準規(guī)定或保質期驗證實驗的結果表明有較長的保質期外，通常平板保存不超過2周～4周，三角瓶和試管的保存不超過3個月～6個月。除標準規(guī)定或保質期驗證實驗的結果表明有較長的保質期外，含有不穩(wěn)定添加成分的培養(yǎng)基應即配即用。對發(fā)生化學反應或含有不穩(wěn)定物質的固體培養(yǎng)基也應即配即用，不可二次融化。實驗室應對貯存培養(yǎng)基的有效期進行規(guī)定。觀察培養(yǎng)基顏色變化，是否有蒸發(fā)/脫水情況，是否有微生物生長。當培養(yǎng)基發(fā)生這類變化時，應停止使用。在使用和進一步加熱前，應事先將培養(yǎng)基放置到室溫。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據，如質量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養(yǎng)基時，應按照配方準確配制，記錄所有細節(jié)信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。
2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋相關瓊脂培養(yǎng)基的融化：培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）融化。經過高壓滅菌的培養(yǎng)基盡量減少重新加熱的時間，避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后立即移開，室溫靜置片刻（約2min)，以免玻璃容器發(fā)生破裂。融化后的培養(yǎng)基放人47℃～50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃～50℃所需的時間取決于培養(yǎng)基的類型、體積和在水在鍋里的分裝量。融化后的培養(yǎng)基應盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩余的培養(yǎng)基凝固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養(yǎng)基，應根據相關標準，縮短融化后放置的時間。將瓊脂培養(yǎng)基倒人類似檢測培養(yǎng)基使用的獨立容器中，插入溫度計，記錄并保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養(yǎng)基應將溫度調節(jié)到44℃～47℃，或按照相關標準調節(jié)溫度。水浴保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入測試增菌液0.1 mL(需活化時另加10％S9混合液o．5 mL)，混勻，迅速傾入底層培養(yǎng)基上，轉動平板，使頂層培養(yǎng)基在底層分布均勻。平放固化后取無菌濾紙片(直徑約為6 mm)，小心放在已固化的頂層培養(yǎng)基的適當位置上，用移液器取適量受試物(如10μL)，點在紙片上，或將少量固體受試物結晶加到紙片或瓊脂表面；37℃培養(yǎng)48 h觀察結果。

2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋相關菌種衰退的根本原因是有關基因的負突變。如果控制產量的基因發(fā)生負突變，則表現為產量下降；如果控制孢子生成的基因發(fā)生負突變，則產生孢子的能力下降。菌種在移種傳代過程中會發(fā)生自發(fā)突變。雖然自發(fā)突變的幾率很低(一般為10-6～10-9)，尤其是對于某一特定基因來說，突變頻率更低。但是由于微生物具有極高的代謝繁殖能力，隨著傳代次數增加，衰退細胞的數目就會不斷增加，在數量上逐漸占優(yōu)勢，最終成為一株衰退了的菌株。
此外，菌種衰退還有以下幾種原因：
1、表型延遲造成菌種衰退，表型延遲現象也會造成菌種衰退。如，在誘變育種過程中，經常會發(fā)現某菌株初篩時產量較高，進行復篩時產量卻下降了。
2、質粒脫落導致菌種衰退，質粒脫落導致菌種衰退的情況在抗生素生產中較多，不少抗生素的合成是受質粒控制的。當菌株細胞由于自發(fā)突變或外界條件影響(如高溫)，致使控制產量的質粒脫落或者核內DNA和質粒復制不一致，即DNA復制速度超過質粒，經多次傳代后，某些細胞中就不具有對產量起決定作用的質粒，這類細胞數量不斷提高達到優(yōu)勢，則菌種表現為衰退。
3、連續(xù)傳代，連續(xù)傳代是加速菌種衰退的一個重要原因。一方面，傳代次數越多，發(fā)生自發(fā)突變(尤其是負突變)的幾率越高；另一方面，傳代次數越多，群體中個別的衰退型細胞數量增加并占據優(yōu)勢越快，致使群體表型出現衰退。
4、不適宜的培養(yǎng)和保藏條件，不適宜的培養(yǎng)和保藏條件是加速菌種衰退的另一個重要原因。不良的培養(yǎng)條件如營養(yǎng)成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等和保藏條件如營養(yǎng)、含水量、溫度、氧氣等，不僅會誘發(fā)衰退型細胞的出現，還會促進衰退細胞迅速繁殖，在數量上大大超過正常細胞，造成菌種衰退。

2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋相關菌種的復蘇與傳代 
1.以無菌操作方式開啟凍干菌種管，加入適量培養(yǎng)液（按菌種選擇培養(yǎng)液，如細菌選擇營養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基），吹吸數次，使菌種融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL相應培養(yǎng)液的試管，滴入少許菌種懸液，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、黑曲霉菌為30 ℃± 1℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第1代培養(yǎng)物。
2.用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應培養(yǎng)基平板（按菌種選擇培養(yǎng)基，如細菌選擇營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃± 1℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第2代培養(yǎng)物。
3.挑取第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于相應培養(yǎng)基斜面或平板（按菌種選擇培養(yǎng)基斜面，如細菌選擇營養(yǎng)瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基平板），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃±1 ℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第3代培養(yǎng)物。
4.取第3代培養(yǎng)物，接種于相應培養(yǎng)基斜面，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間，此為第4代培養(yǎng)物。5.1.5 按上述方法培養(yǎng)至所需代數，傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數及傳代日期等基本信息。
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