產(chǎn)品名稱：醋酸菌分離培養(yǎng)基
產(chǎn)品用途：用于食醋中醋酸菌的分離培養(yǎng)。
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培養(yǎng)基的保質(zhì)期各不相同。不同的標(biāo)準(zhǔn)中均有明確規(guī)定了保存的條件和保質(zhì)期。培養(yǎng)基應(yīng)保存在防止其成分發(fā)生變化的環(huán)境下，即應(yīng)避光、干燥保存；如有必要，用保存于2℃～8℃冰箱中，或依據(jù)培養(yǎng)基要求的儲存條件進(jìn)行保存。除標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定或保質(zhì)期驗證實驗的結(jié)果表明有較長的保質(zhì)期外，通常平板保存不超過2周～4周，三角瓶和試管的保存不超過3個月～6個月。除標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定或保質(zhì)期驗證實驗的結(jié)果表明有較長的保質(zhì)期外，含有不穩(wěn)定添加成分的培養(yǎng)基應(yīng)即配即用。對發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或含有不穩(wěn)定物質(zhì)的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二次融化。實驗室應(yīng)對貯存培養(yǎng)基的有效期進(jìn)行規(guī)定。觀察培養(yǎng)基顏色變化，是否有蒸發(fā)/脫水情況，是否有微生物生長。當(dāng)培養(yǎng)基發(fā)生這類變化時，應(yīng)停止使用。在使用和進(jìn)一步加熱前，應(yīng)事先將培養(yǎng)基放置到室溫。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時，應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關(guān)數(shù)據(jù)，如質(zhì)量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養(yǎng)基時，應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，記錄所有細(xì)節(jié)信息，如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。
醋酸菌分離培養(yǎng)基相關(guān)瓊脂培養(yǎng)基的融化：培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）融化。經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)基盡量減少重新加熱的時間，避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后立即移開，室溫靜置片刻（約2min)，以免玻璃容器發(fā)生破裂。融化后的培養(yǎng)基放人47℃～50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃～50℃所需的時間取決于培養(yǎng)基的類型、體積和在水在鍋里的分裝量。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩余的培養(yǎng)基凝固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養(yǎng)基，應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，縮短融化后放置的時間。將瓊脂培養(yǎng)基倒人類似檢測培養(yǎng)基使用的獨立容器中，插入溫度計，記錄并保存瓊脂的融化、溫度。加入樣品的培養(yǎng)基應(yīng)將溫度調(diào)節(jié)到44℃～47℃，或按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)節(jié)溫度。水浴保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入測試增菌液0.1 mL(需活化時另加10％S9混合液o．5 mL)，混勻，迅速傾入底層培養(yǎng)基上，轉(zhuǎn)動平板，使頂層培養(yǎng)基在底層分布均勻。平放固化后取無菌濾紙片(直徑約為6 mm)，小心放在已固化的頂層培養(yǎng)基的適當(dāng)位置上，用移液器取適量受試物(如10μL)，點在紙片上，或?qū)⑸倭抗腆w受試物結(jié)晶加到紙片或瓊脂表面；37℃培養(yǎng)48 h觀察結(jié)果。

醋酸菌分離培養(yǎng)基相關(guān)菌種衰退的根本原因是有關(guān)基因的負(fù)突變。如果控制產(chǎn)量的基因發(fā)生負(fù)突變，則表現(xiàn)為產(chǎn)量下降；如果控制孢子生成的基因發(fā)生負(fù)突變，則產(chǎn)生孢子的能力下降。菌種在移種傳代過程中會發(fā)生自發(fā)突變。雖然自發(fā)突變的幾率很低(一般為10-6～10-9)，尤其是對于某一特定基因來說，突變頻率更低。但是由于微生物具有極高的代謝繁殖能力，隨著傳代次數(shù)增加，衰退細(xì)胞的數(shù)目就會不斷增加，在數(shù)量上逐漸占優(yōu)勢，最終成為一株衰退了的菌株。
此外，菌種衰退還有以下幾種原因：
1、表型延遲造成菌種衰退，表型延遲現(xiàn)象也會造成菌種衰退。如，在誘變育種過程中，經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)某菌株初篩時產(chǎn)量較高，進(jìn)行復(fù)篩時產(chǎn)量卻下降了。
2、質(zhì)粒脫落導(dǎo)致菌種衰退，質(zhì)粒脫落導(dǎo)致菌種衰退的情況在抗生素生產(chǎn)中較多，不少抗生素的合成是受質(zhì)�？刂频�。當(dāng)菌株細(xì)胞由于自發(fā)突變或外界條件影響(如高溫)，致使控制產(chǎn)量的質(zhì)粒脫落或者核內(nèi)DNA和質(zhì)粒復(fù)制不一致，即DNA復(fù)制速度超過質(zhì)粒，經(jīng)多次傳代后，某些細(xì)胞中就不具有對產(chǎn)量起決定作用的質(zhì)粒，這類細(xì)胞數(shù)量不斷提高達(dá)到優(yōu)勢，則菌種表現(xiàn)為衰退。
3、連續(xù)傳代，連續(xù)傳代是加速菌種衰退的一個重要原因。一方面，傳代次數(shù)越多，發(fā)生自發(fā)突變(尤其是負(fù)突變)的幾率越高；另一方面，傳代次數(shù)越多，群體中個別的衰退型細(xì)胞數(shù)量增加并占據(jù)優(yōu)勢越快，致使群體表型出現(xiàn)衰退。
4、不適宜的培養(yǎng)和保藏條件，不適宜的培養(yǎng)和保藏條件是加速菌種衰退的另一個重要原因。不良的培養(yǎng)條件如營養(yǎng)成分、溫度、濕度、pH值、通氣量等和保藏條件如營養(yǎng)、含水量、溫度、氧氣等，不僅會誘發(fā)衰退型細(xì)胞的出現(xiàn)，還會促進(jìn)衰退細(xì)胞迅速繁殖，在數(shù)量上大大超過正常細(xì)胞，造成菌種衰退。

醋酸菌分離培養(yǎng)基相關(guān)菌種的復(fù)蘇與傳代 
1.以無菌操作方式開啟凍干菌種管，加入適量培養(yǎng)液（按菌種選擇培養(yǎng)液，如細(xì)菌選擇營養(yǎng)肉湯、白色念珠菌選擇沙堡液體培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇蘇通綜合液體培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基），吹吸數(shù)次，使菌種融化分散。取含5.0 mL～10.0 mL相應(yīng)培養(yǎng)液的試管，滴入少許菌種懸液，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、黑曲霉菌為30 ℃± 1℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第1代培養(yǎng)物。
2.用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)物，或從菌種凍存管中取適量菌液/瓷珠，劃線接種于相應(yīng)培養(yǎng)基平板（按菌種選擇培養(yǎng)基，如細(xì)菌選擇營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂培養(yǎng)基、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復(fù)合瓊脂培養(yǎng)基、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃± 1℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第2代培養(yǎng)物。
3.挑取第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面或平板（按菌種選擇培養(yǎng)基斜面，如細(xì)菌選擇營養(yǎng)瓊脂斜面、白色念珠菌選擇沙堡瓊脂斜面、分枝桿菌選擇改良羅氏培養(yǎng)基或其他商品化分枝桿菌專用復(fù)合瓊脂斜面、黑曲霉菌選擇麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基平板），在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間（一般為36 ℃±1 ℃培養(yǎng)18 h～24 h、分枝桿菌36 ℃±1 ℃培養(yǎng)72 h、黑曲霉菌30 ℃±1 ℃培養(yǎng)42 h～48 h），此為第3代培養(yǎng)物。
4.取第3代培養(yǎng)物，接種于相應(yīng)培養(yǎng)基斜面，在適宜溫度下培養(yǎng)至規(guī)定時間，此為第4代培養(yǎng)物。5.1.5 按上述方法培養(yǎng)至所需代數(shù)，傳代時在試管上注明菌種名稱、菌種號、代數(shù)及傳代日期等基本信息。
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