正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

淀粉是植物中糖的主要儲(chǔ)存形式，其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

測(cè)定原理：

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開(kāi)，進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖，采用蒽酮比色法測(cè)定葡萄糖含量，即可計(jì)算淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 35mL×1 瓶，4℃保存； 試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；

淀粉提�。�

1、稱取0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本）于研缽中研碎，加入1mL 試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀。

2、沉淀中加入0.5mL 蒸餾水，放入95℃水浴中糊化 15min（蓋緊，以防止水分散失）。

3、冷卻后，加入 0.35mL 試劑二，25℃常溫提取 15min，振蕩 3-5 次。

4、加入 0.85mL 蒸餾水，混勻，3000g，25℃離心 10min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入 3.75mL 蒸餾水后，緩慢加入 21.25mL 濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑 4℃保存一周；

4、樣本測(cè)定：取50μL 樣本和250μL 工作液至EP 管中，95 度水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中，在620 nm 波長(zhǎng)下記錄測(cè)定吸光度值A(chǔ)。

淀粉含量計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y =5.872x-0.0295；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=2.936x-0.0295；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意 ：由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性，請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。

若吸光值大于1，請(qǐng)將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。提取液的配置：0.35mL 試劑二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。

最低檢測(cè)限為 10μg/g 鮮重或 100ng/mgprot 。