一、產(chǎn)品概述

    脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。DON 的主要產(chǎn)生菌是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)，DON廣泛存在于全球，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。近年來發(fā)現(xiàn)DON可能與人類食管癌、IgA腎病有關(guān)，對人類及動物的健康構(gòu)成威脅。DON屬于劇毒或中等毒物，人畜攝入了被DON污染的食物／飼料后，會導(dǎo)致厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀，嚴重時損害造血系統(tǒng)造成死亡。研究表明，DON可能對免疫系統(tǒng)有影響，有明顯胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遺傳毒性，但無致癌、致突變作用。由于DON的危害嚴重，引起了各國的普遍重視。谷物及飼料中DON的含量有嚴格的限量標準。我國谷物中DON 的限量標準為1．0 mg／kg 。因此，有必要對其進行有效的監(jiān)控。HPLC或GC-MS用作檢測嘔吐毒素的方法，但是其前處理步驟繁瑣，費用昂貴。酶聯(lián)免疫檢測試劑盒則可經(jīng)濟、快速地檢測嘔吐毒素。

二、適用范圍

嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒可定性、定量測定大米、小米、面等谷物和飼料中的嘔吐毒素。

三、試驗原理

 嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒采用競爭ELISA，在微孔板上預(yù)包被嘔吐毒素抗原，加入樣本/嘔吐毒素標準品溶液及辣根過氧化物酶標記的嘔吐毒素抗體。樣本或標準品溶液中的嘔吐毒素與預(yù)包被在板孔上的嘔吐毒素抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標記的嘔吐毒素抗體，與樣本或標準品溶液中的嘔吐毒素結(jié)合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物嘔吐毒素抗原的含量成負相關(guān)。對照標準曲線，即可得出相應(yīng)殘留物嘔吐毒素的含量。

四、注意事項

  1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。

  2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。

  3. 每加一種試劑前需將其搖勻。

  4. 反應(yīng)終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

  5. 不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

  6. 儲存條件：

  7. 保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

  8. 試劑變質(zhì)的跡象：

  9. 發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

  10. 在加入顯色液后，一般顯色時間為20～30min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到35min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應(yīng)時間。

嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。