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| 銷售商： 上海雅吉生物科技有限公司 | 查看該公司所有產(chǎn)品 >> |
- 介紹： 基 因 型E.coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].簡 要 說 明真核生物DNA存在較多“十字型”、“Z字型”等二級或三級結(jié)構(gòu)，這種DNA結(jié)構(gòu)在利用傳統(tǒng)大腸桿菌進行克隆時易被大腸桿菌體內(nèi)的重組酶系統(tǒng)或其他防御系統(tǒng)識別并對其進行重組，刪除等破壞，導致很難對這類DNA進行正確的克隆操作。SURE菌株可以解決這些問題：此菌株體內(nèi)重組酶系統(tǒng)整條通路被破壞，并且(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-) 這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外源DNA進行標記、限制的能力，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同時具有核酸酶(endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變，增強了外源DNA的穩(wěn)定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選；Kanr，Tetr賦予菌株卡那霉素和四環(huán)素抗性。High5TM系列SURE感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達5×108cfu/μg。操 作 說 明1.SURE感受態(tài)細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。注 意 事 項1.感受態(tài)細胞最好在冰上融化。2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。3.操作過程中勿將感受態(tài)暴露于氧化性環(huán)境中，例如超凈臺應(yīng)將臭氧排凈后再使用。4.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。5.此菌株具有卡那霉素，四環(huán)素抗性，擁有這兩種抗性的質(zhì)粒無法使用；對<40 µg/ml氯霉素有抗性，但對100 µg/ml氯霉素敏感。使用其他抗生素參考濃度：氨芐青霉素（終濃度： 100 µg/ml），氯霉素（終濃度：100 µg/ml）。6.High5TM系列SURE感受態(tài)細胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率可達5×108cfu/μg。 ；如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標準protocol。Stratagene standard protocol1.Pre-chill a 14-ml BD Falcon polypropylene round-bottom tubes on ice. Preheat NZY+ broth to 42℃.2.Thaw the cells on ice. When thawed, gently mix and aliquot 100 µl of cells into the pre-chilled tubes.3.Add 4 µl of the β-ME(β巰基乙醇) to the aliquot of cells.4.Swirl the tubes gently. Incubate the cells on ice for 10 minutes, swirling gently every 2 minutes.5.Add 0.1-50 ng of the experimental DNA (or 2 µl of a ligation mixture) to the aliquot of cells.6.Swirl the tubes gently, then incubate the tubes on ice for 30 minutes.7.Heat-pulse the tubes in a 42℃ water bath for 30 seconds. The duration of the heat pulse is critical.8.Incubate the tubes on ice for 2 minutes.9.Add 0.9 ml of preheated (42℃) NZY+ broth and incubate the tubes at 37℃ for 1 hour with shaking at 225-250 rpm.10.Plate ≤200 µl of the transformation mixture on LB agar plates containing the appropriate antibiotic (and containing IPTG and X-gal if color screening is desired).11.Incubate the plates at 37℃ overnight. If performing blue-white color screening, incubate the plates at 37℃ for at least 17 hours to allow color development (color can be enhanced by subsequent incubation of the plates for 2 hours at 4℃).
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細胞
- 注意：部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息，我司不保證所提供信息的權(quán)威性，僅供客戶參考交流研究之用。
試劑盒售后：本公司出售的試劑盒均保質(zhì)保量，質(zhì)量問題均可免費退換，另提供免費代測服務(wù)。
細胞售后：
1. 細胞運輸丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
3. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，未告知的視為產(chǎn)品合格。4-10天內(nèi)出現(xiàn)問題，請?zhí)峁┘毎掌图毎霈F(xiàn)問題的照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟，并跟我公司人員及時溝通判定是否重發(fā)，具體可以參照我官網(wǎng)或者隨貨說明書相關(guān)售后條款。
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