產(chǎn)品名稱：貝爾格萊德病毒型PCR檢測試劑盒
英文名稱：DobravaBelgrade Virus PCR
產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品編號：BH10338P
產(chǎn)品規(guī)格：50次
本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏，還具有以下特點：
1.  即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單。
2.  預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 494 bp。
3.  本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

貝爾格萊德病毒型PCR檢測試劑盒規(guī)格及成分
即用型指標(biāo)Mix 3.0（1.5 mL）
專一性引物對    （100 μL）
陽性對照        （50 μL）    
超純水          （1 mL）
說明書：         1 份
運輸保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
使用方法    
1 實驗所需器材與試劑
1.1 器材
1）PCR儀
2）PCR反應(yīng)管
3）電泳儀及水平電泳槽
4）高速離心機
5）微量移液器及移液器吸頭
1.2 試劑
1）瓊脂糖
2）EB（溴化乙錠）
3）去離子水或雙蒸水
注意事項   
5.1使用本試劑前請仔細閱讀本說明書全文。
5.2 操作時應(yīng)盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個檢測過程中，反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴增應(yīng)分區(qū)域進行，以避免交叉污染。 5.3 實驗時，試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻（混勻時禁止激烈振蕩，只需要進行上下倒置多次進行混勻）。
5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后，應(yīng)盡快上PCR儀進行擴增，以免形成過多的二聚體。
5.5細胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會影響本品的檢測結(jié)果。如果用戶需要進一步提高檢測靈敏度，建議細胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測。
TBP嶙酸正丁酯500克AR，99%
35214扶錄芐alphaChloropfluorotolue
尿糖試劑500克RT
正十六烷基磺醋內(nèi) 1HqXcDqCcNqSULFONIC cCID wo7ium ScLT 08
LALANINEL高級白色結(jié)晶粉末RTsigma
酸性肉湯shēng huà shì jì容量：10克
(先鋒霉素I)
BOCD色酸25克
2.2’聯(lián)麩�；�二肟 cLPHcFURIL DIOXIMq 270
D(+)松三糖 D(+)MqLqZITOSq 29
D葡萄糖一水物shēng huà shì jì容量：25克
5905甲基脲;N甲基基甲酰metxylurea
玻璃珠shēng huà shì jì容量：2～8℃5克
6基2甲基 2Methyl6ethoxy,98.0% 6680 5G 通用試劑
二胺 3Chloro2fluoroaniline,97% 3753 5G 通用試劑
牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因A(MICA)免疫試劑盒 Human major histocompatibility complex class I chain-related gene A,MICA ELISA Kit
免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒 ，英文名： IgE ELISA Kit
Ratai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISA試劑盒大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Humanc-fosELISA試劑盒人c-fosELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
HumanechinococcusaibodyIgGELISAKit人包蟲抗體IgGELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
人白細胞分化抗原40配體(CD40) ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔子纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)免疫試劑盒 Rabbit plasminogen activator inhibitor 1,PAI-1 ELISA Kit
貝爾格萊德病毒型PCR檢測試劑盒嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員12(EAR12)ELISA試劑盒 ，英文名： EAR12 ELISA Kit
PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISA試劑盒豬血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Human1,25-dihydroxyvitaminD3,DVD/DHVD3ELISA試劑盒人1,25二羥基維生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Humanai-IgEreceptoraibodyELISAKit人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
用方法
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取細菌樣品 DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 stn 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
1.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（最好用帶芯槍頭，下同）。
3.先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
1.在 6 號管中加入 5  μL 10E7 拷貝/μL  的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
2.換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5 拷貝/μL 的陽性對照。
3.換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。
4.NC 管中不加任何陽性對照。
5.從 1-6 號管中分別取 5  μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值， 并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 
一．PCR 檢測（20 μL 體系）
1.在 PCR 管中加入下列成分（待測樣品需要做三次重復(fù)，下表只列出一次） 
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照，其他熒光 PCR 儀器（如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX。
建議 PCR 反應(yīng)參數(shù)（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）
3. 數(shù)據(jù)采集
按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合DNA 時，最大吸收光譜在 471 nm，結(jié)合 DNA 時的最大吸收光譜在 500 nm， 最大發(fā)射光譜在 530 nm。
四、數(shù)據(jù)處理
以 stn 陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品濃度的 log 為橫軸，以 Ct 值為縱軸，通過待測樣品的 Ct 值計算出樣品 DNA 的濃度。
 

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