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                                當(dāng)前位置 > 產(chǎn)品目錄 > 試劑 > 分子生物學(xué)試劑 > 大鼠表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)ELISA試劑盒
                                大鼠表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白A(SPA)ELISA試劑盒
                                英文名稱:ELISA Kit for Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma (PPARg)總訪問(wèn):416
                                國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口:進(jìn)口半年訪問(wèn):1
                                產(chǎn)地/品牌:美國(guó)USCN產(chǎn)品類別:分子生物學(xué)試劑
                                規(guī)       格:96T 最后更新:2023-11-3
                                貨       號(hào):
                                CAS   號(hào):
                                參考報(bào)價(jià):800-5000
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                                • 產(chǎn)品介紹
                                • 公司簡(jiǎn)介
                                使用前徹底閱讀說(shuō)明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

                                【工作原理】
                                。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過(guò)PBS或TBS的徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。
                                【每套試劑盒中內(nèi)容】(96T)

                                材料 數(shù)量
                                標(biāo)準(zhǔn)品 96T(2vial)
                                預(yù)包被抗體的96孔板 96T(8×12)
                                生物素標(biāo)記人ANG抗體 96T (1:100)
                                ABC(親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物) 96T (1:100)
                                樣品稀釋液 96T×2
                                抗體稀釋液 96T×1
                                ABC稀釋液 96T×1
                                TMB顯色液A 96T×1
                                TMB顯色液B 96T×1
                                TMB終止液 96T×1
                                ELISA專用洗滌液 96T×1(1:25)

                                【需要而未提供的試劑和器材】
                                1. 37℃恒溫箱。
                                2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
                                3. 自動(dòng)洗板機(jī)。
                                4. 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
                                5. 蒸餾水,容量瓶等
                                6. 干凈的試管和Eppendof管。

                                【注意事項(xiàng)】
                                1. 從-20℃取出的試劑盒,最好在4℃解凍過(guò)夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開(kāi)啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時(shí)出現(xiàn)的分層,否則會(huì)出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
                                2. 開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
                                3. 配制各種試劑時(shí),切記混勻!
                                4. 用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
                                5. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
                                6. 要嚴(yán)格避免操作過(guò)程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活!
                                7. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

                                【洗板方法】
                                手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
                                自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

                                【樣品的準(zhǔn)備和保存】
                                樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,且避免反復(fù)凍融。
                                血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時(shí)或4℃過(guò)夜,離心1000×g 10分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
                                細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

                                【樣品稀釋的一般原則】
                                用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測(cè)因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測(cè)范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

                                【試劑的準(zhǔn)備和保存】
                                A. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用:在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液,徹底溶解后做倍比稀釋。
                                8稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品在2小時(shí)內(nèi)使用。

                                B.生物素標(biāo)記抗體工作液:在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
                                1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量(實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
                                2. 按10ul生物素標(biāo)記抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

                                C.親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)工作液的準(zhǔn)備:在使用前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
                                1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量(實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
                                2. 按10ul親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

                                D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備:在使用之前30分鐘,按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

                                【操作程序】
                                1. 確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
                                2. 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
                                3. 酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
                                4. 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
                                5. 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
                                6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
                                7. 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
                                8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
                                9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過(guò)程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時(shí),即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)最長(zhǎng)不要超過(guò)30分鐘)。
                                10. 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
                                11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。

                                【操作程序總結(jié)】:
                                準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

                                加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)90分鐘

                                洗板2次,加入生物素化人ANG抗體工作液,37℃反應(yīng)60分鐘

                                洗板3次,加入ABC工作液,37℃反應(yīng)30分鐘

                                洗板5次,加入TMB顯色液,37℃反應(yīng)

                                加入TMB終止液

                                30分鐘之內(nèi)讀OD值

                                計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量



                                【特異性】: 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無(wú)交叉反應(yīng)。
                                【保存】: -20℃ [短期內(nèi)(如兩周)可4℃
                                【有效期】: 12個(gè)月(-333℃)。
                                【用途】: 用給我留言于體外定量分析液體標(biāo)本(通用型)。
                                bio-equip.com
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