中喬新舟朋友圈集贊活動(dòng)：49元領(lǐng)無血清細(xì)胞凍存液
從克隆的但是表型各異的MC3T3-E1細(xì)胞系中分離出一系列亞克隆。 從含抗壞血酸培養(yǎng)基生長的成骨細(xì)胞中選擇高或低成骨細(xì)胞分化、礦化的亞克隆。 MC3T3亞克隆4（ATCC CRL-2593）和MC3T3亞克隆14（ATCC CRL-2594）在抗壞血酸和3到4mM無機(jī)磷酸鹽中生長表現(xiàn)出高水平的成骨細(xì)胞分化。 它們10天后形成一個(gè)礦化良好的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。
MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達(dá)作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達(dá)可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。
細(xì)胞的培養(yǎng)
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：MEM α +10%胎牛血清+1%雙抗（注意：MEM α 不含VC組分）
推薦傳代比例：1：4-1：8
換液頻率： 2-3次/周 2-3次/周
培養(yǎng)條件： 5% CO₂，37°C
2 成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①由于誘導(dǎo)時(shí)間比較長，建議提前使用明膠包被6孔板。（注意此處是為了減少誘導(dǎo)過程細(xì)胞漂起、不貼壁）
②建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的MC3T3-E1細(xì)胞，將其消化下來，離心收集，使用MC3T3-E1細(xì)胞完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為1~5×105個(gè)cell/mL，均勻鋪于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：此處細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積以6孔板為例，若為其它培養(yǎng)器皿，請根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積。）
③待細(xì)胞匯合度達(dá)80%~100%時(shí)，即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。
④小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，每孔2mL，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）
⑤每2day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。由于細(xì)胞量比較大，培養(yǎng)液顏色會(huì)偏黃色屬于正�，F(xiàn)象，及時(shí)換液即可。（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）
⑥細(xì)胞誘導(dǎo)3周后，即可進(jìn)行茜素紅染色鑒定。
⑦誘導(dǎo)過程中，已經(jīng)成骨的MC3T3-E1細(xì)胞會(huì)變褐色和變圓。
3.鑒定方法
A.茜素紅染色分析
① 細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次。每孔加入1mL細(xì)胞固定液，室溫固定15-30 min。（注意：操作一定要輕柔。）
② 吸棄細(xì)胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，每孔1mL，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會(huì)有沉淀，吸取時(shí)盡量不要觸及底部。若細(xì)胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。
④光鏡拍照建議留一些pbs,減少光圈的出現(xiàn)，以便呈現(xiàn)更好的成骨效果。
B.成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
礦化亞克隆選擇性表達(dá)成骨細(xì)胞標(biāo)志物、骨唾液蛋白 （BSP）、骨鈣素 （OCN） 堿性磷酸酶（ALP） 骨橋蛋白（OPN）、I型膠原（COL I）和甲狀旁腺激素 （PTH）/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白 （PTHrP） 受體的 mRNA。相關(guān)引物序列如下 
參考文獻(xiàn)
標(biāo)題：Inhibiting Osteolytic Breast Cancer Bone Metastasis by Bone-Targeted Nanoagent via Remodeling the Bone Tumor Microenvironment Combined with NIR-II Photothermal Therapy
作者：Yaoxun Zeng, Zhenxing Pan, Jiongpeng Yuan, Yuqiong Song, Zhenzhen Feng, Zefeng Chen, Zhaoyi Ye, Yushan Li, Ying Bao, Zhili Ran, Xinyi Li, Huiling Ye, Kun Zhang, Xujie Liu, Yan He
期刊：Small
DOI：First published: 21 May 2023
影響因子 ：15.153
引用產(chǎn)品：ZQ0118，ZQ0095，ZQ0098
網(wǎng)址：https://doi.org/10.1002/smll.202301003
標(biāo)題：Amino-Functionalized Zirconium-Based Metal–Organic Frameworks as Bifunctional Nanomaterials to Treat Bone Tumors and Promote Osteogenesis.(2023-11-09)
作者：Jongpeng Yuan,Xujie Liu
期刊：ACS Applied Materials & Interfaces
DOI: 10.1021/acsami.3c11787
影響因子 ：9.5
引用產(chǎn)品：MC3T3-E1, MNNG/HOS and MDA-MB-231 cell
網(wǎng)址：https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acsami.3c11787
茜紅素染色結(jié)果參考圖
相關(guān)產(chǎn)品推薦
1、 MEMα 基礎(chǔ)培養(yǎng)基（ ZQ-700-VC-FREE ）
2、MEMα 完全培養(yǎng)基（ZQ-720-VCF ）
3、MC3T3-E1細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化試劑盒（CSP080）
49元領(lǐng)細(xì)胞凍存液啦！
該無血清凍存液為即用型產(chǎn)品，配方成分明確，不含動(dòng)物來源性蛋白，不含血清。不僅降低了各類細(xì)菌、病毒、支原體等污染風(fēng)險(xiǎn)，保證凍存細(xì)胞的安全，而且減少外源性蛋白對細(xì)胞正常生長和分化的影響此外，該凍存液中含有 DMS0、葡萄糖等各種細(xì)胞營養(yǎng)成分，可以有效提高細(xì)胞存活率和活力，適用于各種動(dòng)物細(xì)胞(細(xì)胞系和原代細(xì)胞)的凍存。具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
1、不含動(dòng)物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性
2、成分明確，無批次差異
3、可直接存放于-80°C冰箱凍存，無需經(jīng)過費(fèi)時(shí)的程序降溫過程(省時(shí)、省力、省錢)
4、獨(dú)特配方有效提高細(xì)胞凍存存活率及復(fù)蘇率
5、即用型，無需現(xiàn)配，即開即用
6、可微量，原位凍存，例如雜交瘤細(xì)胞的凍存省時(shí)高效
7、通用型，適用于凍存各種細(xì)胞系，原代細(xì)胞
1、活動(dòng)日期：2024年3月1日-2024年3月31日
2、活動(dòng)對象：僅限終端客戶參與活動(dòng)
3、兌現(xiàn)日期：2024年4月15日（由公司統(tǒng)一配送到當(dāng)?shù)卮恚?br /> 4、領(lǐng)取地點(diǎn)：各區(qū)域代理
5、活動(dòng)詳情：如對本活動(dòng)有疑問，請關(guān)注中喬新舟公眾號(hào)與我們聯(lián)系
6、本活動(dòng)最終解釋權(quán)歸中喬新舟所有
MC3T3亞克隆24（ATCC CRL-2595）和MC3T3亞克隆30（ATCC CRL-2596）在抗壞血酸中生長表現(xiàn)出很差的成骨細(xì)胞分化。 不形成ECM， 可以作為亞克隆4和14的陰性對照。 礦化的亞克隆選擇的表達(dá)作為成骨細(xì)胞標(biāo)記的mRNA，及唾液酸糖蛋白（BSP），骨鈣素（OCN），和甲狀旁腺激素/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白受體的mRNA。 高或者低的分化潛能的亞克隆在培養(yǎng)中生產(chǎn)出相似數(shù)量的膠原質(zhì)，表達(dá)可比較的基本水平的mRNA編碼Osf2/Cbfa1，一種成骨細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子。
本期為大家總結(jié)了，在誘導(dǎo)MC3T3-E1細(xì)胞過程中的注意事項(xiàng)和具體操作步驟。
細(xì)胞的培養(yǎng)
培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：MEM α +10%胎牛血清+1%雙抗（注意：MEM α 不含VC組分）
推薦傳代比例：1：4-1：8
換液頻率： 2-3次/周 2-3次/周
培養(yǎng)條件： 5% CO₂，37°C
2 成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)步驟
①由于誘導(dǎo)時(shí)間比較長，建議提前使用明膠包被6孔板。（注意此處是為了減少誘導(dǎo)過程細(xì)胞漂起、不貼壁）
②建議取第3~5代、純度達(dá)90%以上、狀態(tài)良好的MC3T3-E1細(xì)胞，將其消化下來，離心收集，使用MC3T3-E1細(xì)胞完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度為1~5×105個(gè)cell/mL，均勻鋪于6孔板中，每孔2mL，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：此處細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積以6孔板為例，若為其它培養(yǎng)器皿，請根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整細(xì)胞密度及培養(yǎng)液體積。）
③待細(xì)胞匯合度達(dá)80%~100%時(shí)，即可進(jìn)行誘導(dǎo)分化。
④小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基，每孔2mL，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）
⑤每2day換用新鮮的誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基。由于細(xì)胞量比較大，培養(yǎng)液顏色會(huì)偏黃色屬于正�，F(xiàn)象，及時(shí)換液即可。（注意：完全培養(yǎng)基加入細(xì)胞前需提前置于37℃預(yù)熱。）
⑥細(xì)胞誘導(dǎo)3周后，即可進(jìn)行茜素紅染色鑒定。
⑦誘導(dǎo)過程中，已經(jīng)成骨的MC3T3-E1細(xì)胞會(huì)變褐色和變圓。
3.鑒定方法
A.茜素紅染色分析
① 細(xì)胞誘導(dǎo)分化結(jié)束后，小心吸棄細(xì)胞培養(yǎng)上清，1×PBS潤洗1~2次。每孔加入1mL細(xì)胞固定液，室溫固定15-30 min。（注意：操作一定要輕柔。）
② 吸棄細(xì)胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，每孔1mL，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會(huì)有沉淀，吸取時(shí)盡量不要觸及底部。若細(xì)胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細(xì)胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。
④光鏡拍照建議留一些pbs,減少光圈的出現(xiàn)，以便呈現(xiàn)更好的成骨效果。
B.成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
礦化亞克隆選擇性表達(dá)成骨細(xì)胞標(biāo)志物、骨唾液蛋白 （BSP）、骨鈣素 （OCN） 堿性磷酸酶（ALP） 骨橋蛋白（OPN）、I型膠原（COL I）和甲狀旁腺激素 （PTH）/甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白 （PTHrP） 受體的 mRNA。相關(guān)引物序列如下
參考文獻(xiàn)
標(biāo)題：Inhibiting Osteolytic Breast Cancer Bone Metastasis by Bone-Targeted Nanoagent via Remodeling the Bone Tumor Microenvironment Combined with NIR-II Photothermal Therapy
作者：Yaoxun Zeng, Zhenxing Pan, Jiongpeng Yuan, Yuqiong Song, Zhenzhen Feng, Zefeng Chen, Zhaoyi Ye, Yushan Li, Ying Bao, Zhili Ran, Xinyi Li, Huiling Ye, Kun Zhang, Xujie Liu, Yan He
期刊：Small
DOI：First published: 21 May 2023
影響因子 ：15.153
引用產(chǎn)品：ZQ0118，ZQ0095，ZQ0098
網(wǎng)址：https://doi.org/10.1002/smll.202301003
標(biāo)題：Amino-Functionalized Zirconium-Based Metal–Organic Frameworks as Bifunctional Nanomaterials to Treat Bone Tumors and Promote Osteogenesis.(2023-11-09)
作者：Jongpeng Yuan,Xujie Liu
期刊：ACS Applied Materials & Interfaces
DOI: 10.1021/acsami.3c11787
影響因子 ：9.5
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網(wǎng)址：https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acsami.3c11787
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該無血清凍存液為即用型產(chǎn)品，配方成分明確，不含動(dòng)物來源性蛋白，不含血清。不僅降低了各類細(xì)菌、病毒、支原體等污染風(fēng)險(xiǎn)，保證凍存細(xì)胞的安全，而且減少外源性蛋白對細(xì)胞正常生長和分化的影響此外，該凍存液中含有 DMS0、葡萄糖等各種細(xì)胞營養(yǎng)成分，可以有效提高細(xì)胞存活率和活力，適用于各種動(dòng)物細(xì)胞(細(xì)胞系和原代細(xì)胞)的凍存。具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
1、不含動(dòng)物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性
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5、即用型，無需現(xiàn)配，即開即用
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7、通用型，適用于凍存各種細(xì)胞系，原代細(xì)胞
活動(dòng)說明
轉(zhuǎn)發(fā)本文到朋友圈，集贊滿49個(gè)，即可49元獲得無血清細(xì)胞凍存液1瓶（規(guī)格50ML 貨號(hào)：CSP042）
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1、活動(dòng)日期：2024年3月1日-2024年3月31日
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