近期，賓夕法尼亞大學(xué)的James Riley課題組和Sangamo公司共同公布了一項用于HIV治愈的I期臨床試驗成果，結(jié)果喜人。該研究試驗利用Maxcyte GT臨床級流式電轉(zhuǎn)系統(tǒng)對HIV患者CD4 T細胞CCR5基因編輯并回輸，以確定這些T細胞如何更好地實現(xiàn)HIV治愈策略。該結(jié)果近期已發(fā)表在The Journal of Clinical Investigation雜志上。論文標題為：CCR5-edited CD4 Tcells augment HIV-specific immunity to enable post rebound control of HIV replication.

 

研究目的：本次臨床試驗探討了鋅指核酸酶（ZFN）體外遞送的方法，CCR5Δ32雜合子是否優(yōu)先受益，CCR5基因編輯的CD4 T細胞對HIV特異性T細胞應(yīng)答的影響以及注入的CCR5基因編輯T細胞在分析治療中斷期間延遲病毒反彈的能力。

研究方法：本試驗采用電轉(zhuǎn)與鋅指核酸酶（ZFN）結(jié)合的體外傳遞方法，首先獲取自體外周血淋巴細胞，分離并富集CD4+細胞。利用MaxCyte-GT^TM流式轉(zhuǎn)染系統(tǒng)，在封閉系統(tǒng)中用ZFN-mRNAs對CD4+T細胞進行電穿染，對轉(zhuǎn)染后的CD4+T細胞進行擴增。研究招募了14名HIV感染者，他們的病毒載量通過抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（ART）得到了很好的控制。研究測量了停藥后病毒反彈的時間，CCR5編輯的CD4 T細胞的持久性以及回輸100億個CCR5基因編輯的CD4 T細胞是否增強了HIV特異性免疫反應(yīng)。在完成細胞回輸后，參與患者進行試驗性停藥。

 

研究時間線和樣本采集點的示圖

研究結(jié)果：這項研究發(fā)現(xiàn)回輸CD4 T細胞耐受性良好，沒有嚴重的不良事件。HIV功能性治愈的金標準是試驗性停藥后病毒反彈時間推遲。與歷史對照相比，觀察到病毒反彈時間略有延遲；14個人中有3個人，似乎在最終反彈之前恢復(fù)了對病毒血癥的控制（其中2個為CCR5Δ32雜合子）。

值得一提的是，只有這些個體的HIV特異性CD8 T細胞反應(yīng)顯著恢復(fù)。在后期病毒反彈時，觀察到病毒對其中一種重新激活反應(yīng)的免疫逃逸，這說明病毒控制和增強的CD8 T細胞應(yīng)答之間存在直接聯(lián)系。

這項臨床研究表明，CCR5基因編輯的CD4 T細胞回輸可以通過增強已存在的HIV特異性免疫應(yīng)答，來幫助實現(xiàn)HIV功能性治愈。

治療中斷期間病毒反彈時間

Sangamo利用MaxCyte電轉(zhuǎn)平臺開展多項HIV治療研究項目
Sangamo是一家全球領(lǐng)先的基因治療公司，已經(jīng)與Maxcyte開展了廣泛的合作，利用Maxcyte流式電轉(zhuǎn)平臺進行多個臨床項目的研發(fā)，尤其是在HIV治療領(lǐng)域。2016年Sangamo公司聯(lián)合美國多所實驗室利用在基因編輯中利用Maxcyte電轉(zhuǎn)技術(shù)實現(xiàn)對CCR5基因在人體造血干細胞中的敲除，結(jié)果表明有效的雙等位基因CCR5敲除效率達到72.9%，經(jīng)過清洗、標記、CD34篩選以及電轉(zhuǎn)后的總回收率達70%，并在臨床前體內(nèi)和體外實驗中都表現(xiàn)出了CCR5基因敲除的可行性和安全性（詳見參考文獻2）。
 
Maxcyte利性的非病毒細胞工程平臺-流式電轉(zhuǎn)技術(shù)平臺，為全球生物醫(yī)藥行業(yè)的合作伙伴賦能，幫助客戶開發(fā)創(chuàng)新性的細胞療法，來滿足病人對先進細胞療法的需求。利用Maxcyte ExPERT電轉(zhuǎn)平臺結(jié)合基因編輯手段安全高效可高度重復(fù)地對人體原代細胞進行遺傳改造，在符合臨床使用的嚴格標準前提下，用于治療遺傳性疾病和癌癥。Maxcyte具有全球技術(shù)支持網(wǎng)絡(luò)，目標是幫助合作伙伴釋放它們產(chǎn)品的所有潛能。

Maxcyte已被全球范圍內(nèi)用戶認可，全球前十制藥公司都采用Maxcyte技術(shù)平臺進行藥物研發(fā)，歐美主要基因編輯和細胞治療公司與Maxcyte合作進行新型的基因和細胞治療產(chǎn)品開發(fā)，如Allogene therapeutics，Editas medicine，CRISPR Therapeutics，Precision biosciences和Kite pharma等。多個頂級學(xué)術(shù)研究機構(gòu)采用Maxcyte技術(shù)研究哺乳動物細胞和干細胞， 如日本京都大學(xué)iPS細胞研究所（CIRA）和美國賓夕法尼亞大學(xué)。

[1] Pablo Tebas, Carl H. June, James L. Riley, et al. CCR5-edited CD4 T cells augment HIV-specific immunity to enable post rebound control of HIV replication[J]. J Clin Invest. 2021.
[2] Digiusto D L, Cannon P M, Holmes M C, et al. Preclinical development and qualification of ZFN-mediated CCR5 disruption in human hematopoietic stem/progenitor cells[J]. Molecular Therapy Methods & Clinical Development, 2016, 3(C):16067.