支原體是一種大小僅為0.2~0.3 um,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45 um)的原核生物,在細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響,而且普通顯微鏡完全無法觀察到支原體,因而細胞被支原體污染一般難以察覺。
支原體污染會對細胞培養(yǎng)造成嚴重危害。它們被證明可以引起多種多樣細胞變化,嚴重的情況下會破壞細胞系。目前支原體的檢測方法包括瓊脂培養(yǎng)實驗、PCR檢測法及Hoechst染色。這些方法有的花費時間長,有的準確性不高。而BMG公司的CLARIOstar酶標儀結(jié)合MycoAlert分析,提供了快速并靈敏的檢測支原體污染的相對簡便的方法。
MycoAlert分析采用化學發(fā)光技術(shù),指示支原體的存在。下圖是加入底物之后,使用CLARIOstar酶標儀檢測發(fā)光強度,支原體陽性對照相對于陰性對照而言,發(fā)光強度明顯增加。
判斷樣本是否有支原體污染通過計算MycoAlert的比率來判斷。CLARIOstar酶標儀自帶的分析軟件MARS,自動計算MycoAlert的比率,并且自動顯示每個樣本是好是壞,樣本是否有支原體污染一目了然。
CLARIOstar酶標儀具有超高的檢測靈敏度,即使MycoAlert陽性對照被稀釋16倍,依然很輕易的檢測出支原體的存在。
BMG公司是德國專業(yè)酶標儀制造者,最新推出的CLARIOstar Plus酶標儀,在化學發(fā)光檢測上能檢測到幾個amol 的ATP, 動態(tài)范圍達到8個數(shù)量級。CLARIOstar Plus酶標儀配備的在位注射器,支持同步注射和信號檢測,不會錯過任何時間點的信號變化,非常適合快速發(fā)光的檢測。CLARIOstar酶標儀結(jié)合MycoAlert分析,只需要短短十幾分鐘就能檢測細胞培養(yǎng)物是否有支原體污染,快速、靈敏、簡單,無論是對細胞治療還是細胞生產(chǎn),或者是藥物篩選都是非常使用的質(zhì)量控制工具。
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