大多數(shù)的細胞計數(shù)儀都是基于染料，以臺盼藍為主，其是最主要和應用最廣的一種染料，還有一種是熒光染料，以吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）為主。除了基于染料的方法外，還有庫爾特細胞計數(shù)方法。下面，我們就一一撥開這些技術(shù)的面紗：
【臺盼藍染色計數(shù)】
臺盼藍是使用最廣的細胞活性染料，常用于檢測細胞濃度與死活。活細胞有完整的細胞膜，臺盼藍無法進入細胞內(nèi)部，因此活細胞不會被染色，而死細胞細胞膜破裂，臺盼藍可進入細胞內(nèi)部并將其染成藍色。細胞經(jīng)過臺盼藍處理后，再通過顯微鏡下觀察或采用成像拍照技術(shù)，就可以對細胞進行計數(shù)和活率分析。目前，根據(jù)細胞染色、測試和分析的方式，分為手動、半自動和全自動三類。
手動細胞計數(shù)和活率分析
手動計數(shù)是傳統(tǒng)的計數(shù)方法，也是我們細胞工作者歷歷在目的“練眼力神法”。操作者使用臺盼藍將細胞進行染色處理，孵育1-3分鐘后，通過移液器或滴管將其加入血球計數(shù)板的計數(shù)區(qū)，為防止產(chǎn)生氣泡，必須一次性充滿計數(shù)區(qū)，然后在顯微鏡下靠眼力人工數(shù)取標準方格中的細胞數(shù)和活死細胞數(shù)，再根據(jù)稀釋倍數(shù)和所取的樣品體積，計算出總的細胞濃度和細胞活率。由于手動計數(shù)費時費力，且不同操作者之間的計數(shù)重復性誤差較大，即使是同一操作者也會出現(xiàn)重復性差的計數(shù)結(jié)果，使得結(jié)果的可靠性和準確性無法保證，因此，現(xiàn)在很多細胞工作者紛紛轉(zhuǎn)向全自動的儀器設(shè)備，以獲得穩(wěn)定準確的結(jié)果，并真真正正的解放人力。
半自動細胞計數(shù)和活率分析
半自動計數(shù)是在臺盼藍染色的基礎(chǔ)上，采用相機拍照進行分析的方法。其前期樣品制備的工作和手動計數(shù)方法相同，人工臺盼藍染色、孵育后，通過移液器將細胞樣品加入到波片計數(shù)板上，再把波片計數(shù)板插入到半自動分析儀的檢測區(qū)，手動調(diào)整半自動分析儀上的旋鈕，主觀選擇染色較好且清晰的拍照區(qū)域，最多選取3-4個區(qū)域進行拍照，再通過軟件進行拍照控制和拍照后的數(shù)據(jù)分析。從過程上來看，半自動計數(shù)方法只是把數(shù)取細胞和計算濃度與活率設(shè)定為自動，其它操作、包括拍照區(qū)域的選擇都是人工操作，且統(tǒng)計意義較小，因此，從根本上來講，其并沒有解決和實現(xiàn)一致性的計數(shù)和活率分析。
全自動細胞計數(shù)和活率分析
全自動計數(shù)是真正意義上的全自動細胞測試，包括臺盼藍染色、上樣、拍照、測試、分析和數(shù)據(jù)記錄，以貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的Vi-CELL XR為典型代表。操作者僅需將待測細胞放入樣品盤，全自動分析儀Vi-CELL XR便會自動執(zhí)行臺盼藍染色，并將染色后的細胞樣品抽取至流動池，通過視頻捕獲技術(shù)進行相機拍照，可連續(xù)拍攝多達100張的圖像信息，統(tǒng)計量是其它方法的15-30倍。拍照后，應用全自動的測試分析，采用同一參數(shù)分析相同的樣品，保證了細胞計數(shù)和活率分析更加標準和規(guī)范，測試結(jié)果也更準確。測試后，各項測試數(shù)據(jù)自動以word、excel、PDF等多種格式保存，實現(xiàn)了數(shù)據(jù)記錄的準確無差。為了滿足GMP和FDA 21 CFR Part 11的要求，所有測試數(shù)據(jù)均以數(shù)據(jù)庫格式保存，擁有完整的電子記錄和電子簽名功能。為了監(jiān)測細胞在不同培養(yǎng)條件下的生長狀態(tài)，Vi-CELL XR可自動地跟蹤培養(yǎng)細胞的各種狀態(tài)參數(shù)，同時根據(jù)需要制作細胞生長曲線。為了滿足對高通量測試的需求，Vi-CELL XR可連續(xù)進行樣品的測試，12位的全自動樣品盤可連續(xù)旋轉(zhuǎn)運行，實現(xiàn)不間斷的樣品測試，真正實現(xiàn)了無人為干擾，完全無差別的自動化準確分析。
【熒光染色計數(shù)】
目前應用熒光染色法進行細胞計數(shù)和活率分析是另一種半自動細胞計數(shù)法，只不過其采用的染料由臺盼藍更換成了熒光染料，多為碘化丙啶（PI）和吖啶橙（AO）雙染料。PI是一種DNA結(jié)合性染料，無膜通透性，不能透過活細胞膜，因此只能染死細胞，熒光顯微鏡下觀察為紅色熒光。而AO具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色，產(chǎn)生綠色或黃綠色均勻熒光。因此，通過產(chǎn)生的熒光差異，采用拍照技術(shù)，便可實現(xiàn)細胞計數(shù)和活率的分析。
正如在臺盼藍染色計數(shù)中對半自動細胞計數(shù)和活率分析的描述，操作者需要對細胞進行熒光染料處理，目前常用的方式有兩種，一種是雙熒光染料一次性采樣裝置，使用此采樣裝置將待測細胞吸入，然后插入到半自動分析儀的檢測區(qū)，另一種是將熒光染色處理后的細胞用移液器加入到波片計數(shù)板上，然后將計數(shù)板插入到檢測區(qū)，再通過手動調(diào)整拍照位置進行拍照并進行數(shù)據(jù)分析。
【庫爾特細胞計數(shù)】
庫爾特計數(shù)是采用庫爾特原理（又名電阻法）進行細胞計數(shù)的方法，細胞通過置于電解液中且內(nèi)外裝有電極的小孔管，置換掉同等體積的電解液，從而引起小孔管內(nèi)外電極間電阻的變化，形成電壓脈沖，脈沖個數(shù)反映的是通過小孔管的細胞的個數(shù)，脈沖的高度反映的是通過小孔管的細胞的大小，只要有一個細胞通過小孔管，就會形成特定的脈沖，因此，通過記錄脈沖個數(shù)和高度，便可實現(xiàn)準確的細胞計數(shù)和粒度分析。庫爾特計數(shù)器也是標準的血細胞計數(shù)方法，作為細胞計數(shù)來說，是行業(yè)內(nèi)最準確的細胞計數(shù)器。但鑒于其原理，庫爾特計數(shù)器并不能直接給出細胞的活率信息，但庫爾特計數(shù)器的分辨率為納米級，因此，可以根據(jù)活死細胞間的體積差異，在一定程度上間接獲知細胞活率信息。
* 本活動最終解釋權(quán)歸貝克曼庫爾特。